PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
PESQUISA DE Escherichia coli O157:H7
Solução de Dulcitol 10%;
Reativo para oxidade (N’N’N’N’-tetrametil-parafenileno-diamina ou oxalato de paraamino-dimetilanilina)
ou tiras para teste de oxidase;
Cloreto férrico;
Reativo de Kovac´s(ou, opcionalmente, reativo de Ehrlich);
Hidróxido de potássio;
Alfa naftilamina 0,5%;
Alfa naftol;
Ácido sulfanílico 0,8%;
Solução aquosa de Cloreto de Cálcio 10 mmol;
Partículas imunomagnéticas de 280nm cobertas com anticorpo antiEscherichia coli
O157;
Sistema miniaturizado para identiÞ cação de Enterobactérias.
4. EQUIPAMENTOS
Equipamentos básicos obrigatórios para laboratórios de microbiologia;
Câmara UV (366 nm);
Misturador de Amostras;
Separador Imunomagnético;
Pipetadores automáticos ajustáveis (5-50, 50-200, 100- 1000L) e ponteiras
correspondentes, com barreira.
5.PROCEDIMENTOS
5.1 Pesagem e preparo da amostra
Pesar assepticamente 25 ± 0,2 g ou pipetar 25 ± 0,2 mL de amostra em sacos de
“stomacher” ou frascos Erlenmeyer estéreis, seguindo as orientações contidas no
Anexo II, “Diluições e soluções”, deste Manual.
5.2 Procedimentos de controle
Aplicar os procedimentos de controle especíÞ cos estabelecidos pelo laboratório.
5.3 Pré-enriquecimento
A cada alíquota adicionar 225 mL de SPT-VCC e incubar por 6 horas a 36 ± 1ºC.
5.4 Separação imunomagnética
Após as 6 horas de incubação, de cada amostra pré-enriquecida, transferir 1 mL para
tubo eppendorf com tampa apegada.
Adicionar a cada eppendorf 20 L de “beads” 280nm cobertas com anticorpo policlonal
antiEscherichia coli O157.
Após homogeneização, por suaves inversões sucessivas do eppendorf, dispor os
tubos no equipamento misturador onde deverão permanecer por 30 minutos em baixa
velocidade.
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