PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
PESQUISA DE Escherichia coli O157:H7
(podem também ser utilizadas tiras para oxidase, comercialmente disponíveis).
O aparecimento de cor azul intensa (N´N´N´N´-tetrametil-parafenileno-diamina)
ou vermelho escuro (oxalato de para-amino-dimetilanilina) é indicativo de reação
positiva.
Não utilizar alças de níquel-cromo ou de aço para realizar a prova de oxidase.
Todas as cepas de Escherichia coli O157:H7 apresentam resultado negativo na prova
de oxidase.
As culturas que apresentam resultado positivo não pertencem à família
Enterobacteriaceae, portanto não necessitam ser submetidas a testes complementares
para Escherichia coli 0157:H7.
5.7 Teste de aglutinação de látex
Submeter as culturas puras obtidas conforme item 5.5 ao teste de aglutinação de
látex, suspendendo-as em duas gotas de solução salina colocadas sobre o cartão de
teste que acompanha o kit.
À primeira, misturar uma gota do látex reagente e sobre a outra uma gota do látex
controle. Misturar por um minuto e observar aglutinação.
Considerar como positivas as culturas que, em um minuto ou menos, apresentarem
aglutinação apenas no látex reagente. Para os controles positivo e negativo, utilizar os
controles que acompanham o kit.
As culturas que apresentarem resultado negativo no teste de aglutinação de látex devem
ser descartadas.
5.8 Testes adicionais
5.8.1 VeriÞ cação da motilidade das culturas suspeitas
A partir das culturas puras, em ágar estoque inclinado, que apresentarem reação positiva
frente ao látex reagente e negativa frente ao látex controle, repicar para tubos contendo
ágar motilidade modiÞ cado, utilizando agulha de inoculação.
Incubar a 36 ± 1ºC por 18 a 24 horas. Observar o tipo de crescimento: difuso (motilidade
positiva) ou apenas na linha de inoculação (motilidade negativa).
As cepas de Escherichia coli O157:H7 apresentam motilidade positiva, enquanto que
a E.coli ATCC 25922 apresenta motilidade negativa.
5.8.2 VeriÞ cação da produção de ȕ-D-glicuronidase e de gás em caldo BRILA-MUG.
A partir das culturas isoladas conforme item 5.5, repicar para tubos com caldo verde
brilhante bile-lactose-metilumbeliferil-glicuronídeo (BRILA-MUG), com tubos de
Durhan invertidos.
Incubar a 36 ± 1ºC por 24 a 48 horas.
Observar a produção de gás nos tubos de Durhan. Anotar os resultados.
Em câmara de UV (366nm), veriÞ car a formação de 4-metil-umbeliferona a partir do
MUG. Considerar como positivo para ȕ-D-glicuronidase as culturas que produzirem
ß uorescência no meio de cultura.
A Escherichia coli O157:H7 não produz ȕ-D-glicuronidase, portanto não se observa
ß uorescência no caldo BRILA-MUG.
A Escherichia coli ATCC 25922 produz ß uorescência (reação positiva) neste meio.
OBS.: A cultura de E.coli O157:H7 ATCC 43888 (não toxigênica) não produz gás no
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