PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
caldo verde brilhante lactose 2%, enquanto que as E.coli O157:H7 verotoxigênicas
ATCC 43889, ATCC 43890 e ATCC 43894 são capazes de produzir gás neste meio.
5.8.3 VeriÞ cação da fermentação do sorbitol, da celobiose e do dulcitol
A partir das culturas isoladas conforme item 5.5, repicar para tubos contendo 3 mL
de caldo vermelho de fenol base adicionado, separadamente, de sorbitol, celobiose
e de dulcitol (esterilizados por Þ ltração), de forma a obter uma concentração Þ nal do
açúcar de 0,1%.
Incubar os tubos a 36 ± 1ºC por 24 a 30 horas. Após incubação, observar a produção
de ácido, evidenciada pela viragem do indicador vermelho de fenol para amarelo nas
culturas fermentadoras dos açúcares presentes.
Os resultados esperados estão na tabela abaixo:
Cultura Sorbitol Celobiose Dulcitol
Escherichia coli O157:H7 - - +
Escherichia hermannii - + -/+
Escherichia fergusonii - + ±
Escherichia coli + -* ±
± : 60% são pos. -/+ : 19% são positivas -*: 2% são positivas
5.8.4 VeriÞ cação da produção de enterohemolisina
A partir das culturas puras obtidas conforme item 5.5, repicar em estrias para a superfície
seca de ágar soja triptona, com cloreto de cálcio e eritrócitos de carneiro (ASSTCa).
Para preparar o ASSTCa, a cada 100 mL de ágar soja triptona adicionar 1 mL CaCl 1M 2
e 5 mL de eritrócitos lavados de carneiro.
Incubar a 36 ± 1ºC por 4 horas. VeriÞ car atividade hemolítica e registrar os resultados
obtidos. Reincubar até 24 horas repetindo a leitura.
Considerar como positivas para produção de enterohemolisina as culturas que não
produzirem hemólise em 4 horas e apresentarem reação hemolítica característica
de alfa-hemolisina (coloração esverdeada ao redor das colônias) após 24 horas de
incubação.
A grande maioria das cepas de Escherichia coli O157:H7 verotoxigênicas são alfahemolíticas.
5.9 Provas Opcionais
Adicionalmente, podem ser utilizados sistemas miniaturizados de provas bioquímicas
para identiÞ cação de enterobactérias, aprovados para uso pela CLA/MAPA.
5.9.1 Sistema miniaturizado para identiÞ cação de enterobactérias
Repicar, para tubos com ágar estoque inclinado, as culturas que apresentaram reação
positiva frente ao látex reagente, negativas frente ao látex controle, motilidade positiva,
ȕ-D-glicuronidase negativa, com ou sem produção de gás a partir da lactose, não
fermentadoras do sorbitol e da celobiose, e capaz de fermentar o dulcitol. Incubar a 36
± 1ºC por 18 a 24 horas.
Seguir as recomendações do fabricante do sistema utilizado.
6. RESULTADOS
Considerar o resultado positivo para Escherichia coli O157:H7 as amostras em que os
isolados se comportarem como abaixo descrito:
456 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS