PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
Procedimentos de Coloração
microrganismos.
Os microrganismos que contêm altos teores de ácido teicóico em sua parede celular
se coram, pela coloração de Gram, em azul intenso e são chamados de “Gram
positivos”.
Os microrganismos que contém lipopolissacarídeos na membrana externa somente
se coram com o contracorante, mostrando-se da cor do mesmo (vermelho), e são
denominados “Gram negativos”.
3.1 Reagentes
3.1.1 Cristal Violeta
Este composto cora toda a célula em azul intenso.
Preparo Solução A
Cristal violeta (90-95% de pureza) ............................................................................2 g
Etanol 95% ...........................................................................................................20 mL
Filtrar em papel de Þ ltro.
Preparo Solução B
Oxalato de amônio .................................................................................................0,2 g
Água destilada ......................................................................................................80 mL
Preparo Solução de trabalho
Misturar as soluções colocando-se a solução B sobre a A. Deixar em repouso por 24
horas, Þ ltrando em seguida. Estocar em frasco âmbar.
3.1.2 Solução de lugol (iodo iodeto de potássio)
O iodeto substitui o cloro do cristal violeta, formando um complexo insolúvel em
água.
Preparo da solução de trabalho:
Cristais de iodo (ou ressiblimado) .............................................................................1 g
Iodeto de potássio .....................................................................................................2 g
Água destilada ....................................................................................................300 mL
Misturar e deixar em repouso até dissolução.
1.1.3 Descorante
A solução de etanol 95% - acetona atua como descorante. A descoloração ocorre
apenas nas células de microrganismos Gram negativos. Alguns autores sugerem
que o álcool altera a permeabilidade da membrana externa dos organismos Gram
negativos, devido à sua ação sobre a membrana lipopolissacarídica, permitindo a
retirada do complexo cristal violeta-iodeto da célula.
Preparo da solução descorante de etanol - acetona:
Acetona ................................................................................................................10 mL
Etanol 95% .........................................................................................................100 mL
1.1.4 Safranina (contracorante)
A safranina atua como contracorante tornando as células Gram negativas coradas e
visíveis. As células de microrganismos Gram positivos provenientes de culturas velhas,
lesadas por qualquer motivo ou mortas, também podem ser coradas pela safranina.
Preparo do contracorante - Safranina O - Solução estoque
Safranina O .........................................................................................................2,5 mL
Etanol 95% .........................................................................................................100 mL
Solução de trabalho
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