PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
Procedimentos de Coloração
ß agelo é formado por milhares de monômeros polimerizados de ß agelina ordenados
de maneira a formar um único ß agelo.
Algumas diÞ culdades podem ser encontradas quando se deseja demonstrar este tipo
de estrutura em uma bactéria:
a) A produção de ß agelos nas bactérias não é contínua e é dependente de vários
fatores como temperatura, substrato, estágio do crescimento, etc.
b) Os ß agelos podem ser acidentalmente removidos da bactéria pela pipetagem ou
homogeneização muito vigorosa.
c) O ß agelo se despolimeriza facilmente, isto é, se dissocia em monômeros de ß agelina
com freqüência (quando a temperatura alcança mais de 60ºC, quando o pH se torna
muito ácido (pH 4,0) e quando a célula está em presença de álcalis, de uréia e de
solventes orgânicos).
d) É necessária a aplicação de técnicas para aumentar o diâmetro dos ß agelos, de
forma a torná-los visíveis pelas técnicas microscópicas usualmente adotadas em
laboratórios microbiológicos.
O ácido tânico contido no corante se ligará ao ß agelo, tornando-o mais grosso. A
demonstração do ß agelo ocorrerá devido à ligação do corante ao ácido tânico.
5.2 Procedimento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Preparar cultura da bactéria em estudo sobre a superfície de ágar infusão de
cérebro ou em ágar soja triptona (com ou sem sangue), incubando em temperatura
e tempo adequados;
Transferir delicadamente uma alçada do crescimento para tubo contendo cerca de
3mL de água destilada. Inverter o tubo uma vez para homogeneizar a suspensão.
Colocar uma gota desta suspensão sobre uma lâmina e deixar secar ao ar;
Cobrir a lâmina com o corante e deixar por 5 minutos, até que um brilho metálico
esverdeado cubra metade da área. Não deixar o corante secar sobre a lâmina;
Retirar o corante enxaguando com água;
Secar;
Observar ao microscópio com objetiva de imersão.
5.3 Preparo do corante - Solução A
Fucsina (certiÞ cada para coloração de ß agelo) ..................................................... 0,5 g
Álcool etílico 95% ................................................................................................50 mL
Misturar e deixar em repouso de um dia para o outro para dissolução.
Preparo do corante - Solução B
Cloreto de sódio ...................................................................................................0,75 g
Ácido tânico ............................................................................................................1,5 g
Água destilada ....................................................................................................100 mL
Misturar vigorosamente as soluções A e B.
A mistura de corantes pode ser usada até 2 meses após o preparo, se mantida
sob refrigeração. Poderá se formar um precipitado. O precipitado não deve ser
homogeneizado com o restante da solução durante procedimento de coloração.
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