PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
platina, transferir uma alçada de 3 mm de diâmetro, retirada da superfície de cada
cultivo, para placas de ágar tiosulfato citrato sais biliares sacarose (TCBS) e de ágar
gelatina (AG).
Incubar as placas em posição invertida a 36 ± 1ºC por 24 horas.
5.4 Leitura
VeriÞ car o aparecimento de colônias típicas.
No ágar TCBS, as colônias de Vibrio cholerae apresentam-se com coloração amarela,
ligeiramente elevadas no centro, com bordas translúcidas e 2 a 3 mm de diâmetro.
Algumas cepas lento-fermentadoras da sacarose se apresentam verdes no TCBS,
após 24 horas de incubação.
No ágar gelatina, as colônias de Vibrio cholerae apresentam-se como colônias
transparentes com uma zona opaca ao seu redor que, geralmente, torna-se mais
nítida após alguns minutos sob refrigeração.
5.5 Provas preliminares para a identiÞ cação do Vibrio cholerae
5.5.1 Preparo do inóculo
Selecionar 3 ou mais colônias de cada placa dos diversos meios.
Repicar cada colônia para um tubo com ágar sal triptona (T1N1) inclinado.
Incubar a 36 ± 1°C por 24 horas.
5.5.2 “String Test”
Colocar uma gota (grande) de solução de desoxicolato de sódio 0,5 % sobre uma
lâmina.
Retirar uma alçada da cultura mantida em T1N1 inclinado (5.5.1) e suspendê-la na
gota.
O aparecimento, em cerca de um minuto, de uma massa mucóide, que forma um
Þ lamento quando a alça é suspensa a uma altura de 2 a 3 cm da lâmina (“string” test
positivo), é presuntivo da presença de Vibrio cholerae.
5.5.3 Prova da oxidase
Usando palitos de madeira, de plástico descartáveis ou pipetas Pasteur, estéreis, ou
alça de platina, realizar a prova de oxidase espalhando a cultura sobre papel Þ ltro
impregnado com o reativo para oxidase, ou sobre tiras de papel para teste de oxidase,
comercialmente disponíveis.
Fazer a leitura em 10 a 20 segundos. Após este tempo, podem ocorrer reações falsopositivas.
O aparecimento de cor azul (N’N’N’N’-tetrametil-parafenileno-diamina) ou vermelho
intenso (oxalato de para-amino-dimetilanilina) é indicativo de reação positiva.
Não utilizar alças de níquel-cromo ou alças de aço para realizar a prova de oxidase,
pois traços de óxido de ferro na superfície ß ambada podem produzir reação falsopositiva.
O Vibrio cholerae é oxidase positiva.
5.5.4 Coloração de Gram
A partir da cultura mantida em T1N1, fazer um esfregaço e corar pelo método de Gram,
de acordo com as instruções contidas no Anexo VII, “Procedimentos de coloração”,
deste Manual.
446 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS