PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
9.
8.1
COLORAÇÃO DE GRAM - CARBOL FUCSINA MODIFICADA POR HUCKER
PARA Campylobacter
Procedimento
1. Preparar esfregaço dos cultivos suspeitos;
2. Deixar secar ao ar e Þ xar delicadamente passando sobre uma chama de bico
de Bunsen;
3. Corar pelo método de Gram modiÞ cado por Hucker;
4. Corar por 1 minuto com cristal violeta oxalato de amônio;
5. Lavar com água;
6. Cobrir com lugol por 1 minuto;
7. Lavar com água;
8. Descorar com etanol 95% até que saia todo o corante;
9. Lavar com água;
10. Contracorar com carbol fucsina por 10 a 20 segundos;
11. Lavar com água;
12. Secar e examinar em microscópio de campo claro com objetiva de imersão.
Todos os cultivos de Campylobacter se apresentam como bastonetes Gram negativos,
curvos ou espiralados, com arranjo típico em forma de asa de gaivota.
8.2 Preparo dos corantes de Gram modiÞ cados por Hucker para Campylobacter
8.2.2 Solução Corante Cristal violeta-oxalato de amônio
Solução A
Cristal violeta (90-95% de pureza) .........................................................................2,0 g
Etanol 95% .........................................................................................................200 mL
Solução B
Oxalato de Amônio ................................................................................................8,0 g
Etanol 95% ........................................................................................................800 mL
Preparo da solução Þ nal
Misturar a solução A e B . Deixar em repouso por uma noite ou mais em temperatura
ambiente. Filtrar em Þ ltro de papel grosso.
8.2.3 Preparo da solução de lugol para coloração de Campylobacter
Cristais de iodo ou iodo ressiblimado .....................................................................1,0 g
Iodeto de potássio ..................................................................................................2,0 g
Água destilada . ................................................................................................. 300 mL
8.2.3 Descorante
Etanol 95%
8.2.4 Preparo da carbol Fucsina 0,3%
Solução A:
Fucsina básica........................................................................................................0,3 g
Álcool etílico ........................................................................................................10 mL
Solução B:
Fenol (cristais fundidos) .....................................................................................5,0 mL
Água destilada .....................................................................................................95 mL
Misturar as soluções A e B.
498 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS