PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
PESQUISA DE Paenibacillus larvae subsp. Larvae
3.REAGENTES E MATERIAIS
Vidraria e demais insumos básicos obrigatórios em laboratórios de microbiologia;
Tubos para centrífuga tipo Falcon ou similar, com tampa rosqueável, cap. 100 mL;
Ágar cereus (PEMBA) - base* (opcional: ágar manitol gema de ovo poliximina segundo
Mossel (MYP) – base);
Ágar estoque*;
Ágar soja triptona*;
Emulsão de gema de ovo 50%*;
Ácido pipemídico solução 0,2%*;
Ácido nalidíxico solução 0,1%*;
Tiamina cloridrato solução aquosa 0,1%**;
Leite desnatado UHT**;
Ágar ágar com extrato de levedura**;
Ágar nutriente sem extrato de levedura;
Caldo cérebro-coração com tiamina (BHIT);
Solução salina fosfatada tamponada pH 7,2 (PBS);
Peróxido de hidrogênio 3%;
Caldo experimental para anaeróbios;
* Componente do ágar Bacillus larvae (ABL);
** Componente do ágar leite com tiamina (ALT).
4. EQUIPAMENTOS
Centrífuga (3.000 x g);
Banho-maria a 80ºC;
Termômetro 100ºC.
5. PROCEDIMENTOS
5.1 Preparo da amostra
Mel e produtos “in natura”: Aquecer a amostra em banho-maria a 45ºC para facilitar a
manipulação da mesma e a homogeneização dos esporos presentes.
Transferir, assepticamente, 20 mL da amostra para tubo de centrifuga estéril e
adicionar 30 mL de solução salina fosfatada tamponada (PBS).
Homogeneizar bem.
Produtos da colméia lioÞ lizados: pesar, assepticamente, 5g do produto em tubo de
centrífuga estéril e adicionar 45 mL de PBS. Deixar em repouso por 10 a 15 min.
Homogeneizar bem.
Pólen: pesar, assepticamente, 5g da amostra e adicionar 45 mL de PBS misturando
vigorosamente. Filtrar a mistura em papel Þ ltro nº 2 (Whatman). Deixar em repouso
por 2 horas para decantação do pólen residual. Transferir cuidadosamente para tubos
de centrífuga estéreis com tampa.
5.2 Procedimentos de controle
Aplicar os procedimentos de controle especíÞ cos estabelecidos pelo laboratório.
5.3 Concentração por centrifugação
Centrifugar a 3.000x g por 30 minutos.
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