PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP) DE MICRORGANISMOS MESÓFILOS AERÓBIOS VIAVEIS
colônias suspeitas de Bacillus sporothermodurans.
Quando o crescimento bacteriano for devido à presença de esporos de Bacillus
sporothermodurans na amostra em análise, será observado crescimento abundante
de colônias lisas, de forma regular, com coloração entre branco e bege, com diâmetro
máximo de 3 mm, facilmente identiÞ cáveis, nas placas com ABHI.
No ágar nutriente isento de extrato de levedura, o Bacillus sporothermodurans
comumente não forma colônias visíveis, porém poderão se desenvolver colônias
puntiformes de coloração entre branco e bege.
Selecionar de 2 a 3 colônias correspondentes a cada um dos tubos positivos e repicar
para tubos com ABHI inclinado.
Incubar a 36 ± 1ºC por até 72 horas e realizar os seguintes testes conÞ rmatórios:
5.6 Coloração de Gram
Preparar esfregaço das colônias suspeitas e corar pelo método de Gram
Quando forem observados bastonetes Gram positivos, realizar a prova da catalase
conforme o item 5.7.
Quando forem observados microrganismos com morfologia e características diferentes
de bastonetes Gram positivos, considerar o tubo correspondente como positivo para
presença de aeróbios mesóÞ los.
5.7 Catalase
Com auxílio de alça de platina, palito de madeira, bastão de vidro ou Pipeta de Pasteur,
estéreis, transferir a cultura para uma lâmina ou placa de vidro contendo uma gota de
peróxido de hidrogênio 3%. Misturar o inóculo ao peróxido e observar a reação.
A não formação de borbulhas indica prova negativa para catalase. A formação de
borbulhas indica prova positiva para catalase.
A maioria dos membros do gênero Bacillus apresenta reação de catalase positiva.
Quando a coloração de Gram demonstrar a presença de bastonetes Gram positivos
e a prova da catalase for positiva para a cultura em teste, proceder à conÞ rmação da
presença de Bacillus sporothermodurans por meio das provas da oxidase, hidrólise
da esculina, fermentação da glicose, redução do nitrato, produção de urease e
crescimento em anaerobiose, conforme abaixo descrito.
5.8 Oxidase
Usando alça de platina, Pipeta de Pasteur, palitos de madeira ou de plástico
descartáveis, estéreis, realizar a prova da oxidase, espalhando a cultura sobre papel
Þ ltro impregnado com o reativo ou sobre tiras de papel com reativo para oxidase,
comercialmente disponíveis.
Fazer a leitura em 10 a 20 segundos. Após esse tempo, reações falso positivas podem
ocorrer.
O aparecimento de cor azul (N’N’N’N’-tetrametil-parafenileno-diamina) ou vermelho
intenso (oxalato de para-amino-dimetilanilina) é indicativo de reação positiva.
Não utilizar alças de níquel-cromo ou alças de aço inoxidável para realizar a prova
de oxidase pois traços de óxido de ferro na superfície ß ambada pode produzir reação
falso positiva.
O Bacillus sporothermodurans apresenta reação de oxidase positiva.
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