PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
PESQUISA DE Salmonella
5.7.1.3 Descarboxilação da lisina
Utilizar caldo lisina ou ágar LIA.
Inocular o caldo lisina e adicionar selo estéril (vaspar, vaselina, paraÞ na), visando evitar
o contato do meio com o ar e o conseqüente aparecimento de uma falsa alcalinização
na superfície do meio por degradação aeróbia do substrato protéico.
Quando usar o ágar, inocular através de picada profunda, estriando na superfície
inclinada do bisel.
Incubar a 36 ± 1ºC por 24 a 30 horas.
Observar se ocorreu descarboxilação da lisina pela alcalinização do meio, o que é
demonstrado pela não alteração de cor do indicador presente.
A atividade da enzima lisina descarboxilase é dependente do pH, sendo mais ativa em
pH abaixo de 5,5.
A acidiÞ cação do meio é obtida pela fermentação da glicose presente. Nessa etapa
do processo, ocorre a viragem do indicador púrpura de bromocresol, de violeta para
amarelo.
É recomendável a inoculação de um tubo controle de caldo base para descarboxilação
sem lisina, para comprovação da acidiÞ cação pela fermentação da glicose. Esse tubo
deve permanecer amarelo até o Þ nal do período de incubação.
Na condição anaeróbia, obtida pelo uso da camada de selo (no caldo lisina) ou na base
(do LIA), todo o oxigênio não combinado é consumido pelo microrganismo presente, na
fase inicial de crescimento.
A descarboxilação da lisina, que ocorre posteriormente, resulta na produção de uma
diamina (cadaverina) e CO 2
, que conferem ao meio características de alcalinidade e nova
viragem da cor do indicador, que passa de amarelo para violeta. A diamina cadaverina
é estável quando produzida em condições anaeróbias.
A maioria das salmonelas é capaz de produzir lisina descarboxilase.
Quatro por cento das cepas de Salmonella não descarboxilam a lisina.
A Salmonella paratyphi A e alguns outros sorovares não produzem lisina
descarboxilase.
5.7.1.4 Meio SIM
Inocular com picada o meio de cultura.
Incubar a 36 ± 1ºC por 24 a 30 horas.
A motilidade é caracterizada pela difusão do crescimento por todo o meio. Se for restrito
à linha de semeadura, indica que o microrganismo é imóvel.
A maioria das salmonelas apresenta motilidade positiva. A Salmonella Gallinarum e a
Salmonella Pullorum apresentam motilidade negativa.
O meio SIM é o meio mais indicado para a veriÞ cação da produção de H 2
S.
O H 2
S é um gás incolor produzido pelo microrganismo em teste, pela redução do tiosulfato
presente no meio. A revelação da presença de H 2
S se realiza por meio da reação do
H 2
S com o citrato de ferro e amônio (presente no meio), formando um precipitado negro
insolúvel.
Quinze por cento das culturas de Salmonella Choleraesuis e 95% das de Salmonella
Paratyphi A não produzem H 2
S.
A maioria das salmonelas produz H 2
S.
Quatorze por cento das cepas de Salmonella são H 2
S negativo.
Após a leitura da motilidade e da produção de H 2
S, adicionar algumas gotas de reativo
de Kovac´s (ou, opcionalmente de reativo de Ehrlich) aos tubos para veriÞ car se houve
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