PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
As culturas de Listeria sp apresentam reações VM e VP positivas.
5.8 IdentiÞ cação de Listeria monocytogenes
As culturas que tenham conÞ rmado as características do gênero Listeria deverão ser
testadas para diferenciação entre Listeria monocytogenes e outras espécies por meio
das seguintes provas bioquímicas:
5.8.1 Produção de ȕ-hemólise
Sobre a superfície seca de ágar sangue desÞ brinado de cobaio ou carneiro (ACNS),
estriar o inóculo com alça ou semear com agulha, por picada. Incubar a 36 ± 1ºC por
24 a 48 horas.
A reação positiva se traduz pelo aparecimento de zona clara transparente ȕ-hemólise)
(
ao redor das colônias.
As culturas de Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii e Listeria seeligeri são
ȕ-hemolíticas.
OBS.: A utilização de sangue de cobaio desÞ brinado nesta prova oferece a vantagem
de zonas de hemólise mais claras, especialmente com culturas de L.monocytogenes
fracamente hemolíticas.
5.8.2 CAMP teste
Em ágar Columbia com ácido nalidíxico adicionado de 5% de sangue de carneiro
desÞ brinado (CNAS), com auxílio de agulha ou alça de 1 ȝL, traçar uma linha
perpendicular à linha previamente semeada com S. aureus. Tomar o cuidado para que
as linhas não se toquem.
Incubar a 36 ± 1ºC por 72 horas, em atmosfera de 2 a 5% de dióxido de carbono
(CO 2
).
As culturas de Listeria monocytogenes e Listeria seeligeri produzem zona clara de
hemólise total acentuada próximo à linha de crescimento do Staphylococcus aureus.
Opcionalmente, este teste pode ser feito com S. aureus e R. equi. Nesse caso, traçar
na placa de CNAS uma linha vertical com inóculo de S. aureus e outra com R. equi,
distantes alguns centímetros entre si. Semear as culturas teste em linhas horizontais
entre as linhas de S. aureus e R. equi, mantendo distância de cerca de 1,5 cm entre as
linhas e cuidando que estas não toquem as linhas de S. aureus e R. equi.
Incubar a 36 ± 1ºC por 72 horas, em atmosfera de 2 a 5% de dióxido de carbono
(CO 2
).
Após a incubação, examinar as placas para veriÞ cação de hemólise na zona de
interação, próximo às linhas verticais. A atividade hemolítica de L. monocytogenes e
L. seeligeri se apresenta aumentada próximo a linha de crescimento do S. aureus.
As demais listerias apresentam reação de CAMP negativa com o S. aureus. A reação
de CAMP produzida pela L. ivanovii com R. equi se caracteriza por ser mais intensa
e se apresentar em forma de ß echa. As L. innocua, L. welshimeri e L. grayi são nãohemolíticas
e não apresentam reação de CAMP positiva com o S. aureus nem com o
R. equi.
O CAMP teste diferencia L. ivanovii de L. seeligeri e pode diferenciar uma L. seeligeri,
fracamente hemolítica, de L. welshimeri. Isolados que dão reações típicas para L.
monocytogenes, exceto para a produção de hemolisina, devem ser testadas para CAMP
antes de serem identiÞ cadas como L. innocua (não hemolítica).
A maioria dos isolados de L. monocytogenes produz também uma zona de intensiÞ cação
da hemólise junto à linha de crescimento do R. equi.
424 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS