PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
PESQUISA de Listeria monocytogenes
1. OBJETIVOS E ALCANCE
Estabelecer método analítico para a detecção de Listeria monocytogenes em alimentos
de origem animal;
A metodologia aplica-se a todos os alimentos cárneos e lácteos.
2. FUNDAMENTOS
2.1 Enriquecimento Seletivo
O enriquecimento seletivo, realizado em duas etapas (a primeira em caldo UVM, e a
segunda em caldo Fraser), tem a Þ nalidade de inibir a ß ora acompanhante, permitindo
a recuperação de baixos números de células de Listeria sp.
O efeito seletivo no caldo UVM é exercido pela associação de ácido nalidíxico e
acriß avina e no caldo Fraser pelo cloreto de lítio, ácido nalidíxico e acriß avina.
2.2 Seleção e Isolamento
Nos produtos cárneos, a seleção se realiza em dois meios sólidos: ágar triptose com
ácido nalidíxico (ATN) e ágar Palcam (AP), enquanto que nos produtos lácteos esta
se realiza em ágar Oxford (AO), ágar Palcam (AP) e ágar triptose com ácido nalidíxico
(ATN).
As substâncias impedientes presentes nos meios sólidos são ácido nalidíxico no ATN,
sulfato de polimixina B, acriß avina, cloreto de lítio e ceftazidina no AP, e cloreto de lítio,
acriß avina, sulfato de colistina, cefotetan, cicloheximide e fosfomicina no AO .
A seleção no ATN baseia-se nas características das colônias, quando observadas sob
luz oblíqua, em estereoscópio. No AP, observa-se a não fermentação do manitol e a
formação de esculetina pela hidrólise da esculina, reação revelada pela presença de
ferro trivalente. No AO, as colônias de Listeria sp apresentam-se pretas, rodeadas por
halo negro devido à hidrólise da esculina.
2.3 ConÞ rmação da presença de Listeria sp
A conÞ rmação bioquímica de Listeria sp realiza-se por meio da veriÞ cação da produção
de catalase, observação das características morfológicas e tintoriais, veriÞ cação do
crescimento típico em meio semi-sólido e, adicionalmente, por meio da veriÞ cação
da incapacidade de redução de nitrato e veriÞ cação da positividade nas reações de
Vermelho de Metila e Voges Proskauer (VM-VP).
2.4 IdentiÞ cação de Listeria monocytogenes
A diferenciação das espécies de Listeria sp realiza-se por meio da veriÞ cação da produção
de ȕ-hemólise em ágar sangue de cobaio ou ágar sangue de carneiro, veriÞ cação da
capacidade de produzir reação de CAMP positiva com S. aureus (e opcionalmente
também com Rodococcus equi), e veriÞ cação da capacidade de fermentação dos
carbohidratos ramnose, xilose e manitol. A utilização concomitante de culturas de R.
equi e S. aureus no CAMP teste é útil para a diferenciação de L. ivanovii, que apresenta
reação de CAMP forte com R. equi (em forma de ß echa). Quando se julgar conveniente,
a identiÞ cação poderá ser realizada por meio de um sistema comercialmente disponível
420 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS