PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
Após centrifugação, descartar cuidadosamente o sobrenadante.
Ressuspender o sedimento em 1 mL de PBS e transferir para tubos com tampa de
rosca. Aquecer a 80ºC, em banho-maria, por 10 minutos.
5.4 Isolamento
Transferir 0,1 mL da suspensão preparada conforme item 5.3 para a superfície seca
de placas com ABL. Com o auxílio de bastão tipo “hockey”, espalhar cuidadosamente
o inóculo sobre a placa.
Paralelamente, usando alça de 10 L, inocular a suspensão por estrias sobre a
superfície seca de outra placa com ABL.
Incubar as duas placas invertidas a 36 ± 1ºC por até 5 dias, observando, após 48h e
depois diariamente, o crescimento de colônias típicas de Paenibacillus larvae.
No ABL, as colônias típicas de Paenibacillus larvae se apresentam planas, com
superfície suavemente granulada, achatadas, com ou sem centro elevado de maior
densidade, com bordas levemente irregulares, sem brilho, de cor verde- amarelada
e diâmetro de 2 a 5 mm, sem halo de precipitação da lecitina, com ou sem halo de
lipólise;
Alguns isolados podem apresentar colônias com centro muitas vezes mais denso
(opaco) que as bordas (translúcidas).
5.5 Seleção
Selecionar 3 a 10 colônias típicas e testar quanto à presença de catalase.
5.5.1 Prova da Catalase
Com auxílio de uma alça de platina, bastão de vidro, palito de madeira ou pipeta de
Pasteur estéreis, retirar uma alíquota do cultivo, transferir para uma lâmina ou placa
de vidro contendo uma gota de peróxido de hidrogênio a 3%. Misturar o inóculo ao
peróxido e observar a reação.
A não formação de borbulhas indica prova negativa para catalase.
A formação de borbulhas indica prova positiva para catalase.
As culturas de Paenibacillus larvae são catalase negativas.
Repicar as colônias catalase negativas para tubos contendo ágar leite com tiamina
inclinado e incubar a 36 ± 1ºC por 24 a 48 h. Manter essas culturas para testes
complementares, caso sejam necessários.
5.6 Provas ConÞ rmativas
Realizar as provas conÞ rmativas completas em cada uma das colônias catalase
negativas.
5.6.1 Coloração de Gram
Das colônias suspeitas, fazer esfregaço e corar pelo método de Gram.
O P.larvae se apresenta como bastonete Gram positivo, comumente longo e Þ no,
porém, pode se apresentar de diversos tamanhos, em cadeias de comprimento
variável.
As culturas que se apresentarem como suspeitas no Gram e catalase negativas
devem ser testadas para:
5.6. 2 Crescimento em superfície de ágar nutriente sem extrato de levedura
A partir das colônias catalase negativas, repicar também em tubos com ágar nutriente
460 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS