PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

Procedimentos e Normas para Exportações de Produtos Lácteos
Selecionar 3 a 5 colônias típicas e semeá-las em tubos com ágar estoque inclinado.
Incubar a 36 ± 1ºC por 24 horas.
De cada tubo, fazer esfregaço e corar pelo método Gram para veriÞ car a presença
de bastonetes curtos Gram positivos, com extremidades quadradas dispostos em
cadeias.
Os esporos são centrais ou sub-terminais.
Das culturas puras em ágar estoque inclinado, realizar as seguintes provas:
5.6 IdentiÞ cação Bioquímica
5.6.1 Motilidade e redução de nitrato
Inocular, com agulha, tubos contendo ágar motilidade-nitrato.
Incubar a 36 ± 1ºC por 18 a 24 horas.
Após incubação, veriÞ car o tipo de crescimento presente.
Culturas imóveis mostram crescimento apenas na linha de inoculação, enquanto que
as móveis crescem de forma difusa.
O Bacillus cereus em 50 a 90% dos casos mostra-se móvel.
Após a leitura da motilidade, adicionar aos tubos 2 a 3 gotas de alfa naftilamina 0,5%
e 2 a 3 gotas de ácido sulfanílico 0,8%. O aparecimento de coloração rosa indica
positividade para redução de nitrato.
Quando não houver desenvolvimento de coloração, adicionar ao tubo alguns
miligramas de pó de zinco. Nesta situação, o aparecimento de coloração rosa indica
reação negativa, enquanto que o não desenvolvimento de cor indica positividade.
O Bacillus cereus reduz o nitrato a nitrito.
5.6.2 ȕ-hemólise em ágar sangue de carneiro
Inocular por estria em placa com ágar sangue de carneiro. Incubar a 36 ± 1ºC por 24
horas. Observar a produção de ȕ-hemólise característica do Bacillus cereus.
Bacillus cereus é produtor de ȕ-hemólise.
5.6.3 Decomposição da tirosina
Inocular por estrias a superfície de ágar tirosina (inclinado em tubo ou distribuído em
placas).
Incubar a 36 ± 1ºC por 48 horas. Após incubação, observar o aparecimento de uma
zona clara próxima ao crescimento produzida pela decomposição da tirosina.
Nos casos em que houver dúvidas, reincubar por até 7 dias a 36 ± 1ºC.
O Bacillus cereus decompõe a tirosina.
5.6.4 Crescimento rizóide
Inocular com alça sobre a superfície seca de ágar nutriente, depositando o inóculo no
ponto central da placa.
Incubar a 36 ± 1ºC por 48 a 72 horas.
Após incubação veriÞ car o tipo de crescimento.
Crescimento rizóide se caracteriza pelo aparecimento de colônias com longas
extensões em forma de raízes ou longos Þ os, típicas de Bacillus mycoides.
O Bacillus cereus não apresenta crescimento rizóide, porém algumas cepas podem
apresentar colônias rugosas em forma de galáxia.
5.6.5 Teste para veriÞ cação da presença de corpúsculos de inclusão cristalina
A partir das culturas suspeitas repicadas em ágar estoque inclinado (item 5.5) e
deixadas em temperatura ambiente por 2 a 3 dias, veriÞ car a presença de corpúsculos
de inclusão cristalina procedendo conforme item 7 do Anexo VII, “Procedimentos de
396 G-100
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS PEQUENAS E MÉDIAS
COOPERATIVAS E EMPRESAS DE LATICÍNIOS