PROCEDIMENTOS E NORMAS PARA EXPORTAÇÕES DE PRODUTOS LÁCTEOS - G100

CGAL - Coordenação Geral de Apoio Laboratorial
PESQUISA DE Listeria monocytogenes
devem estar com as superfícies secas, de forma a proporcionar a obtenção de colônias
isoladas.
Incubar as placas de ATN a 30 ± 1ºC por 24 horas e as placas de AP na mesma
temperatura, por 24 a 48 horas.
5.6 Seleção
Com auxílio de lupa ou estereoscópio com iluminação angular de 45º, selecionar 3 a 5
colônias de cor azulada ou azul-acinzentada em ATN.
Selecionar, com o auxílio de conta-colônias ou de estereoscópio com iluminação normal,
colônias pretas rodeadas por halo escuro em AO.
Selecionar, com o auxílio de conta-colônias ou de estereoscópio com iluminação normal,
colônias verde-amareladas rodeadas por zona escura, ou colônias verde-acinzentadas,
em AP.
5.7 ConÞ rmação da presença de Listeria sp
Repicar o mesmo inóculo para tubos com ágar estoque inclinado e para placas contendo
ATN. Incubar a 30 ± 1ºC por 24 horas. VeriÞ car a pureza das culturas no ATN. Utilizar as
culturas do ágar estoque para a realização das provas de conÞ rmação e identiÞ cação.
5.7.1 Prova da catalase
Em uma placa de Petri, depositar 1 gota de peróxido de hidrogênio 3%. Com auxílio
de alça de platina, bastão de vidro, palito de madeira ou pipeta de Pasteur, retirar uma
alíquota do cultivo e misturar com a gota do reagente. A presença de catalase se traduz
por desprendimento de borbulhas de oxigênio (catalase positiva). Das culturas catalase
positivas, fazer um esfregaço para coloração de Gram.
5.7.2 Coloração de Gram
A Listeria sp se apresenta como bastonete curto ou na forma de cocobacilo, Gram
positivo.
5.7.3 Prova da motilidade típica
Inocular uma alíquota da cultura em ágar motilidade, com agulha, por picada. Incubar
em estufa de B.O.D. (Demanda Biológica de Oxigênio) a 22-25°C por 2 a 5 dias. Após
incubação, veriÞ car o tipo de crescimento.
A Listeria sp apresenta crescimento móvel característico em forma de guarda-chuva.
5.7.4 Prova de Redução de Nitrato
Após a leitura da motilidade, adicionar a cada tubo 2 a 3 gotas de alfa-naftilamina
0,5% e 2 a 3 gotas de ácido sulfanílico a 0,8%.
O aparecimento de coloração rosa indica positividade.
Quando não houver desenvolvimento de coloração, adicionar ao meio alguns miligramas
de pó de zinco. Nesse caso, o aparecimento de coloração rosa indica reação negativa
e a não alteração de cor indica positividade.
As culturas de Listeria sp não reduzem o nitrato.
5.7.5 Prova de VM-VP
Inocular tubos com caldo VM-VP e incubar a 36 ± 1ºC, por 5 dias.
Após a incubação, pipetar alíquotas de 5 e 1 mL da cultura para dois tubos estéreis.
No tubo contendo 5 mL adicionar 2 a 3 gotas de solução de vermelho de metila a
0,06%.
O aparecimento da cor vermelha indica reação VM positiva.
No tubo contendo 1 mL, adicionar 0,6 mL de alfa-naftol solução alcoólica 5% e 0,2 mL
de hidróxido de potássio solução aquosa 40% (nesta ordem) e agitar.
Deixar em repouso por 1 a 2 horas. O aparecimento da cor vermelha escura indica
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