30845 Suppl Giot.pdf - Giornale Italiano di Ortopedia e Traumatologia

Scaffold 3D a confronto per la rigenerazione ossea con aDSC (Adipose Derived Stem Cells)
Fig. 1. Caratterizzazione immunofenotipica delle cellule staminali derivate dal tessuto adiposo (ADSC)
dopo tre passaggi in coltura. Le ADSC esprimono i marker di superficie CD73 e CD90 caratteristici delle
cellule staminali mesenchimali, e non esprimono il marker CD45 caratteristico delle cellule staminali
della linea ematopoietica.
dante e omogenea matrice extracellulare in cui le cellule erano
inglobate (Fig. 2).
a
B
C
Fig. 2. Microscopia elettronica a scansione degli scaffold seminati con ADSC e coltivati per 21 giorni
in terreno osteogenico. A) PLGA; B) PLGA/HA; C) Titanio trabecolare.
Le cellule hanno secreto un’abbondante e omogenea matrice extracellulare che ricopre completamente
la struttura degli scaffold (A e B) e tende anche a riempire i pori della struttura stessa (C).
S156
La concentrazione totale delle proteine secrete dalle ADSC era
0,573 ± 0,021 mg/mL negli scaffold di titanio trabecolare, 0,120 ±
0,010 mg/mL negli scaffold di PLGA e 0,414 ± 0,018 mg/mL negli
scaffold di PLGA/HA. La quantità di fosfatasi alcalina presente
era simile negli scaffold di polimero (PLGA: 2,60 ± 0.05 pg/cell x
scaffold e PLGA/HA: 2,91 ± 0.01 pg/cell x scaffold), ma significativamente
maggiore negli scaffold di titanio trabecolare (4,00 ±
0.13 pg/cell x scaffold).
Sulle ADSC cresciute sugli scaffold di titanio trabecolare in presenza
di terreno di crescita e di terreno osteogenico era condotta
anche una valutazione dell’andamento nel tempo dell’espressione
del gene fosfatasi alcalina (Fig. 3) per monitorare il progressivo
differenziamento osteogenico delle cellule. L’espressione diventa
maggiore nelle cellule coltivate in terreno osteogenico con una
differenza statisticamente significativa dopo 21 giorni rispetto a
7 e 14 giorni. Anche l’attività della fosfatasi alcalina delle cellule
cresciute per 21 giorni su questi scaffold in presenza di terreno
osteogenico era statisticamente maggiore rispetto a quella delle
cellule coltivate in terreno di crescita (Fig. 4).
Fig. 3. Andamento nel tempo dell’espressione del gene fosfatasi alcalina delle ADSC seminate sugli
scaffold di titanio trabecolare e coltivate in terreno di crescita e in terreno osteogenico. Ogni colonna
rappresenta la media ± E.S. di 3 diversi scaffold. I dati normalizzati per GUSB sono espressi come fold
change rispetto al valore a 7 giorni. *, p≤ 0.05 rispetto a 7 e 14 giorni.
Fig. 4. Attività della fosfatasi alcalina delle ADSC coltivate in terreno di crescita e osteogenico per
21 giorni. Ogni colonna rappresenta la media ± E.S. di 5 diversi scaffold; *, p≤ 0.05 rispetto al
terreno di crescita.