focus mul - UKSH Universitätsklinikum Schleswig-Holstein

Projekt 2: Isolation und Charakterisierung mesenchymaler Stammzellen
Mesenchymale Stammzellen werden aus dem Knochenmark sowie dem retroperitonealen
Fettgewebe von Mäusen isoliert. Verschiedene Aufreinigungs- und
Kultivierungsbedingungen werden getestet. Die Zellen werden immunologisch
charakterisiert. Ziel ist es, definierte adulte Stammzell-Linien zu etablieren und die
Proliferation zu optimieren. Die Stammzellen differenzieren u.a. in vitro in Chondrozyten.
Eine Dedifferenzierung soll durch Kultivierung auf einer speziellen
Kollagen-Matrix verhindert werden.
Projekt 3: Einfluss des Transkriptionsfaktors Sox9 auf renale Differenzierungsvorgänge
Eine Sox9-knock out-Zelllinie wird im Vergleich mit einer nicht genetisch
modifizierten Wildtyp-ES-Zelllinie hinsichtlich der Differenzierung in spezifische
renale Zelltypen unterucht. Erste Untersuchungen zeigen, dass in der knock-out-
Linie keine glomerulären Strukturen detektiert werden können. Sox9 scheint eine
Rolle bei der Kondensation mesenchymaler Zellen zuzukommen, die der Bildung
der glomerulären Ringstrukturen in den ES-Zell-Kulturen vorausgeht.
Projekt 4: Charakterisierung Erythropoietin-produzierender Zellen in ES-Zell-
Kulturen
Während der Embryonalentwicklung wird Erythropoietin zunächst in der Leber und
später in der Niere gebildet. Durch immunhistochemische Färbungen sowie
Untersuchungen der spezifischen Genexpression mittels RT-PCR und ELISA-
Technik werden EPO-produzierende Zellen in ES-Zell-Kulturen charakterisiert.
Durch Hypoxämie soll die Differenzierung der Stammzellen in diesem spezifischen
Zelltyp induziert werden.
Projekt 5: Differenzierung embryonaler Stammzellen in Chondrozyten
Fünf Verschiedene murine ES-Zell-Linien wurden hinsichtlich ihrer spontanen
Differenzierungseffizienz in Knorpelzellen untersucht. Mit der Zelllinie BLC6
konnten im Vergleich zu den anderen analysierten Zelllinien deutlich mehr terminal
differenzierte Chondrozyten generiert werden.
Projekt 6: Selektion von Chondrozyten aus ES-Zell-Kulturen
Knorpelzellen sollen aus Stammzell-Klonen, die Selektions- bzw. Reporterkonstrukte
tragen, isoliert werden. Die regulatorische Region des Collagen II-Gens
wird genutzt, um die Expression von Selektionsmarkern wie Puromycin-
Resistenzgen oder von Reportergenen wie "green fluorescence protein“ zu
steuern. Chondrocyten, die aus diesen genetisch-modifizierten ES-Zell- Klonen
differenziert werden, können so via Antibiotikaselektion bzw. Cell-Sorting selektioniert
werden.
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