Propedeutica y Semiologia tomo I

PROPEDÉUTICA CLÍNICA Y SEMIOLOGÍA MÉDICA
SECCIÓN II
de origen genético (monogénico, cromosómico o
multifactorial), ambiental (por agentes biológicos, físicos
o químicos) o inespecíficos (cuando a pesar de las
evidencias de un defecto prenatal, no es posible identificar
el factor etiológico preciso).
Métodos de estudio
Existen numerosos métodos de estudio en los cuales
el genetista se apoya para llegar al factor etiológico:
1. Análisis detallado del fenotipo del paciente.
2. Análisis del estudio familiar a través de la confección
de árboles genealógicos.
3. Estudios citogenéticos y dermatoglifos (patrones de los
surcos en la piel de las palmas y los dedos de las manos
y los pies).
4. Cromatina sexual (por simple raspado de la mucosa
oral) y estudio del cariotipo (por cultivo de sangre
periférica).
5. Análisis bioquímico, que incluye reacciones cualitativas
para determinar alteraciones metabólicas, electroforesis
de las proteínas, etcétera.
6. Estudios fisiológicos e inmunológicos.
7. Otros que contribuyan a delimitar el papel de la genética
como factor etiológico de la enfermedad en estudio.
Métodos de estudios genéticos más específicos
– Determinación de sustratos afectados por bloqueos en
una vía metabólica: métodos de estudio como determinaciones
cualitativas en orina, determinaciones de
aminoácidos, oligosacáridos, mucopolisacáridos y
lípidos por cromatografía en capa delgada y determinaciones
cuantitativas de aminoácidos, ácidos orgánicos,
oligoelementos, etcétera.
– Determinación de actividad de enzimas específicas,
previa evaluación clínica y bioquímica: métodos de análisis
de la actividad enzimática en leucocitos, eritrocitos,
cultivos de fibroblastos, y otros.
– Determinaciones de fenotipos de proteínas de tipo
enzimático, de transporte, etc.: métodos electroforéticos
o enfoque isoeléctrico; ejemplos: los tipos de hemoglobinas,
los fenotipos de alfa 1 antitripsina, los
fenotipos de transferrinas, etcétera.
– Estudios para el diagnóstico de aberraciones cromosómicas:
métodos sin cultivo de células para la observación
de cuerpos de Barr o cuerpo Y que permiten la
identificación nuclear de cromatina correspondiente a
los cromosomas X y Y (por este método es posible identificar
aberraciones del número de estos cromosomas)
y métodos, previo cultivo de células (linfocitos, líquido
amniótico u otros tejidos) y detención de la división
celular en metafase, que permiten el análisis del número
y de la estructura de los cromosomas, al clasificarlos
de acuerdo con su tamaño y forma, así como el patrón
de bandas que se utilice para su diferenciación
longitudinal. Esta clasificación recibe el nombre de
cariotipo (clasificación de los 23 pares de cromosomas
diploides). Este análisis incluye la diferenciación de
cada par cromosómico, al aplicar técnicas de bandas
G, Q, R, NOR, C, según se requiera.
– Estudios citogenéticos de alta resolución o prometafásicos,
para la detección de pequeños defectos estructurales
no detectados por métodos metafásicos.
– Métodos citogenéticos moleculares utilizando hibridación
in situ (FISH), al aplicar, previa desnaturalización
del ADN cromosómico, segmentos de ADN complementarios
y marcados que facilitan la identificación de
los segmentos cromosómicos con los que puede hibridar
atendiendo al fenómeno de complementariedad de bases
del ADN. Con este método pueden detectarse pequeños
defectos cromosómicos o reconocerse el origen
paterno o materno de estos.
– Estudios moleculares que permiten identificar genotipos
con mayor precisión, utilizando métodos de Southern
blotting (previa digestión con enzimas de restricción y
electroforesis en gel de policridamina y posterior hibridación
con ADN complementario al gen o a segmentos
de ADN adyacentes al mismo, con segmentos
de ADN complementario marcados denominados
“probes o sondas”) o PCR ( reacción en cadena de la
polimerasa que posibilitan la amplificación de segmentos
del ADN problema). Los métodos moleculares pueden
brindar información indirecta cuando el estudio se
realiza sobre el ADN adyacente y flanqueando a la mutación
que se estudia, conocidas previamente por análisis
de ligamiento la localización del gen y la distancia
entre la mutación y los segmentos estudiados. A estos
métodos se les denomina moleculares indirectos, y para
su estudio se hace imprescindible la caracterización
molecular del individuo afectado y de sus familiares,
dependiendo del número de individuos a estudiar y el
parentesco entre ellos, y del tipo de herencia con que se
segrega la mutación.
También puede estudiarse directamente el gen, si se conoce
su secuencia y ya ha sido clonado previamente.
En este caso al estudio molecular se le denomina directo
y cuando tiene poca heterogeneidad alélica puede
utilizarse este método incluso para diagnóstico de la
enfermedad, no así cuando hay gran heterogeneidad
alélica, como por ejemplo las mutaciones para la fibrosis
quística del páncreas, en cuyo caso el diagnóstico clínico
tiene importancia particular.
Otro método de estudio molecular es la secuenciación
de la mutación, de particular uso en el caso
anterior.
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