4. Uluslararası Beyaz Et Kongresi

Bakteriyofaj terapisi, ilk kez d’Herelle tarafından 1919’da ağır dizanteri hastası bir çocukta
etkin olarak uygulanmıştır (6). Günümüzde gıdalarda fajların kullanımı ile ilgili pek çok çalışma
yapılmaktadır. Gıdaların bakterilerle kontamine edilip fajların test edildiği bakteriler arasında
Camphylobacter (7, 8), E. coli (9, 10) Brochothrix (11), Salmonella (12-15) ve Listeria (15)
mevcuttur.
Bu çalışmada, kanatlı kesimhanelerinin atık sularından L. monocytogenes’lere (LM) litik etki
gösteren bakteriyofaj izolasyonu yapılarak izolatların karakterizasyonlarının ve konak litik
etki profillerinin belirlenmesini takiben L. monocytogenes’e spesifik ve en geniş spektrumda
litik etki gösteren bakteriyofajlar arasından 2-5 listeriyofajın seçilerek bakteriyofaj kokteylinin
hazırlanması amaçlanmıştır.
Materyal ve Metot
Örnek toplama:Çalışmada 12 aylık sürede kanatlı kesimi yapılan üç farklı mezbahaya aylık
olarak yapılan ziyaretlerde toplam 60 mezbaha atık suyu örneği L. monocytogenes’e (LM) litik
etkili bakteriyofaj (listeriyofaj) izolasyonu açısından toplanmıştır. Mezbaha atık su numuneleri,
mezbaha ziyaretleri süresince steril numune kaplarına 50 ml olarak alınmıştır. Soğuk zincir
altında hızlıca laboratuvara getirilip listeriyofaj izolasyonu analizlerine başlanmıştır.
Bakteri kültürleri:Listeria monocytogenes serotiplerine litik bakteriyofajların izolasyonunda,
LM ATCC 19111 (serotip 1/2a), N7155 (serotip 1/2b), ATCC 7644 (serotip 1/2c), N7143 (serotip
3a), NCTC 5214 (serotip 4a), RSKK 475 (serotip 4b) ve RSKK 476 (serotip 4c) olmak üzere
toplam 7 referans suş konak bakteri olarak kullanılmıştır.
Listeriyofajların konak spesifitelerinin ve litik etki spektrumlarının (bakteriyofaj duyarlılık
profili) belirlenmesinde;
i) Sığır (6), koyun (7) karkas ve piliç boyun derisinden (22) elde edilen toplam 35 LM izolatı,
ii) Daha önceki bir çalışmada hindi kıymadan izole edilen 32 LM izolatı (n: 13 serotip 1/2a, n:
3 serotip 1/2b, n: 3 serotip 1/2c ve n: 13 serotip 4b),
iii) LM ATCC 19111 (serotip 1/2a), N7155 (serotip 1/2b), ATCC 7644 (serotip 1/2c), N7143
(serotip 3a), NCTC 5214 (serotip 4a), RSKK 475 (serotip 4b) ve RSKK 476 (serotip 4c)
olmak üzere 7 LM referans suşu,
Listeria monocytogenes’e litik etkili bakteriyofaj izolasyonu ve faj duyarlılıklarının tespiti
:Atık su örneklerinden 10 ml alınmış, steril 0,22 µm çaplı milipor filtreden geçirilerek steril
tüplere aktarılmıştır. Böylece atık su örnekleri kontamine oldukları bakteri ve partiküllerden
arındırılmıştır. Bakteriyofaj zenginleştirmesi amacıyla filtratlardan 500’er µl alınarak, 7 adet
2’şer ml’lik steril ependorf tüplere aktarılmış ve üzerlerine TSB’de (Oxoid CM0129) 37°C’de 1
gece zenginleştirilmiş (Nüve EN120) L. monocytogenes kültürlerinden (LM ATCC 19111 [serotip
1/2a], N7155 [serotip 1/2b], ATCC 7644 [serotip 1/2c], N7143 [serotip 3a], NCTC 5214 [serotip
4a], RSKK 475 [serotip 4b] ve RSKK 476 [serotip 4c]) birinden 1 ml inokule edilerek 30ºC’de 1
gece inkübasyona (Nüve EN120) bırakılmıştır. İnkübasyonu takiben her bir ependorf tüpüne 100
µl kloroform (CHCl 3
) eklenmiştir (LM hücrelerinin lizisi ve bakteriyofajların hücreden çıkarak
süspansiyon içinde serbest kalması amacıyla). Karışım hafifçe karıştırıldıktan sonra 3000 ×
g’de 15 dakika santrifüj (Beckman Coulter 22R Centrifuge, Fullerton, CA, ABD) edilmiştir.
Santrifüjü takiben üstte kalan sıvı (baktariyofaj içeren) ayrı bir tüpe aktarılmış ve 10 -1 ’den 10 -
382