4. Uluslararası Beyaz Et Kongresi

Brilliant green Phenol-red Lactose Sucrose Agar’a (BPLS) (Merck,1.07237)) çizme yöntemi ile
ekim yapılarak plaklar 37 o C’de 24-48 saat inkübe edildi. BPLS agarda üreyen pembe kırmızı
renkli, kenarları düzgün, renkteki tipik kolonilerden 3-5’i seçilerek Triptic Soy Agar’a (TSA)
(Merck,1.05458) geçildi.
Salmonella spp’nin identifikasyonunda MALDI-TOF yöntemi ile çalışma: BPLS agarda üreyen
şüpheli Salmonella spp. izolatları TSA’ya geçildikten sonra MALDI-TOF (VITEK MS) ile
değerlendirildi. Elde edilen veriler “MALDI Biotyper software version 3.0” (Bruker Daltonik
GmbH, Almanya) ile analiz edilerek dentifikasyon tamamlandı (15).
Salmonella spp.’ izolatlarının PCR ile doğrulanması: PCR koşullarının optimizasyonunu takiben
Widjojoatmodjo ve ark. (16) ve Fluit ve ark. (17) tarafından önerilen protokol gereği oriC gen
sekansını oluşturan primer (F: 5’-TTA TTA GGA TCG CGC CAG GC-3’- R: 5 -AAA GAA TAA
CCG TTG TTC AC-3’) çiftleri kullanılarak PCR işlemi yapıldı.
PCR amplifikasyonu ve elektroforez: İdentifikasyonu tamamlanan izolatların DNA ekstraksiyonu
kaynatma metoduna göre yapıldı. oriC geni için PCR karışımı, toplam 50 μl hacimde 1X PCR
Buffer, 1,5 mM MgCl 2
, 100 μM dNTP (Sigma, D7295), 2 U Taq-Polymerase (Sigma D4545),
her primerden (Alpha DNA) 0.5 μM ve 10 μl DNA olacak şekilde hazırlandı. OriC geni
amplifikasyonu Thermal Cycler’da (Bio-Rad MJ mini Gradient CA -USA) koşulları ise 94 °C’de
5 dakika ilk denatürasyon ve 35 siklüs, 94 °C’de 1 dakika denatürasyon, 53 °C’de 1 dakika
primer bağlanması, 72 °C’de 1 dakika primer uzaması ve 72 °C’de 10 dakika son uzama olarak
gerçekleştirildi (16,17). Elde edilen amplikonların elektroforez işlemi %2’lik agaroz içinde 80
volt akımda gerçekleştirildi. Elektroforez işlemi Bio-Rad PowerPac Basic Power Supply (CA-
USA) güç kaynağı ve Bio-Rad Wide Mini Sub-Cell GT Cell (CA-USA) elektroforez tankında
gerçekleştirildi. Elektroforez sonunda oriC geni UV-transilluminatörde 163 bp’de görüntülendi.
İstatiksel analizler: Organik tavuk parça etlerindeki (but, kanat, göğüs) kontaminasyon
oranlarının farklılığının istatistiksel değerlendirmesinde Kİ-KARE oran testi ve Genelleştirilmiş
Doğrusal Analizler testi kullanılmıştır.
Bulgular
Analiz bulguları çerçevesinde; toplam 150 örneğin 42’sinin (%28) Salmonella spp. ile kontamine
olduğu saptandı. Analiz bulgularının örneklere göre dağılımı incelendiğinde; but örneklerinin
15’i (15/50-%30), kanat örneklerinin 20’si (20/50-%40), göğüs örneklerinin ise 7’sinin (7/50-
%14) Salmonella spp. ile kontamine olduğu saptandı. Örneklerinden toplamda 210 adet şüpheli
izolat toplandı ve analiz sonucunda 93 adedi Salmonella spp. olarak identifiye edildi. 93 adet
izolatın 32’si (%34,4) but, 46’sı (%49,4) kanat, 15’i (%16,1) ise göğüs örneğinden elde edildi.
Analiz verilerine uygulanan istatistiksel değerlendirmede organik kanatlı eti örneklerinden but
ve kanatlardaki kontaminasyon oranı benzer bulunurken, göğüs örneklerine ait kontaminasyon
oranı her iki bölüme göre düşük düzeyde istatistiksel sonuç vermiştir (p