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326RODRÍGUEZ, A. & PÉREZ, I.3.-ÚtilesVacutainer desechables, camisas y tubos al vacíode 10cc.Tubos para suero de 5 cc. Pistola de 5cc demarca Kaycee Ovillector Mk3 y Philips de 5cc.Agujas hipodérmicas de hierro. Centrífuga marcaBeckman GS-GKR. Arcón congelador (-30º C).4.- VacunasPolibascol 9 lote Be 96009 y Miloxan lote456215-E.Realizado en Vigo por la doctora Mª EugeniaPuentes.6.-MétodoSe inoculó por vía subcutánea, con cada una delas vacunas un total de 54 animales adultos en avanzadoestado de gestación, elegidos al azar de un lotede parición de 300 ovejas en un rebaño de 1300 animales.Se inyectó 2 cc de Polibascol-9 (lote B-1) oMiloxan (lote B-2) a cada animal,via subcutánea.5.-Material del laboratorioNecesario para realizar la determinación de anticuerposneutralizantes en ratón.Nº DE TUBOS Día postvacunación Producto aplicadoB-1-0 27 0 (día vacunac) Polibascol 9B-2-0 27 0 (día vacunac) MiloxanB-1-1 21 12 (Pre parto) Polibascol 9B-2-1 20 12 (preparto) MiloxanB-1-2 23 18-23 (7-11 días postparto) Polibascol 9B-2-2 22 18-23 ( 7-11 días postparto) MiloxanB-1-3 22 74-94 (57-71 días postparto) PolibascolB-2-3 21 74-94 (57-71 días postparto) MiloxanB-1-4 22 112 (100 días postparto) Polibascol 9B-2-4 20 112 (100 días postparto MiloxanSe tomaron las siguientes muestras de sangre (10cc) de la vena yugular identificando cada muestracon el número de la oveja y el distintivo de cadalote:El criterio elegido para la incorporación de muestrasa los lotes ha sido el de incluir todas las muestrasque pertenecen a la misma situación y origende cada lote, es decir, supeditar la representatividaddel pool de muestras de cada toma sobre cualquierotro criterio. Por esto en las muestras B-1-1 y B-2-1 desaparecen animales, que luego se reincorporan,por haber parido muy anticipadamente y no poderincluirse en la toma preparto. 1 oveja abortó y otramurió.Finalmente, se sangraron 30 ovejas del rebaño deorigen (no participantes en la prueba) a los 11 mesesde haber sido vacunadas con Miloxan, para podertener una referencia del nivel de anticuerpos circulantesal año de la vacunación.Las muestras de sangre se dejaron coagular a temperaturaambiente durante 10 horas y se retiró elcoágulo y centrifugó a 3000 r p m durante 5 minutospara obtener una muestra de suero de unos 3cc. Posteriormente,se congelaron las muestras hasta suenvio al laboratorio, donde el día de la recepción delas muestras, se prepararon pools equivolumétricosde cada lote de muestras. Se fraccionaron en alícuotasy se conservaron congeladas a –30º C hastasu valoración.En cada pool de suero se determinó el nivel deanticuerpos neutralizantes antitoxina beta y épsilonde Clostridium perfringens siguiendo el método devaloración serológica que describe la FarmacopeaEuropea en la prueba de potencia en ratones paravacunas de Cl perfringens.
NIVEL SEROLÓGICO DESARROLLADO TRAS LA APLICACIÓN DE DOS INMUNOLÓGICOSDIFERENTES CONTRA ENTEROTOXEMIA EN OVEJAS ADULTAS327Distintos volumenes de cada pool de suero seincubaron con una dosis test de toxina beta o épsilony se determinó la capacidad neutralizante en ratón.La valoración final se expresa en U.I. Rango devaloración:Antitoxina beta: 2 ; 5 ; 10 y 20 U.I/ml suero.Antitoxina épsilon: 0,25 ; 0,5 ; 1 ; 5 y 10 U.I/mlsuero.RESULTADOSTabla 1. Nivel de anticuerpos neutralizantes en pools de sueros de ovejas vacunadas conPolibascol-9.Grupo B-1Nivel de anticuerpos neutralizantes UI/ml sueroAnti-toxina betaAnti-toxina épsilonB-1-0 2,5 1B-1-1 10 >10B-1-2 >20 >10B-1-3 >20 >10B-1-4 10-20 >10Tabla 2: Nivel de anticuerpos neutralizantes en pools de sueros de corderos hijos de lote B-1(Polibascol-9)Grupo Cor-1Nivel anticuerpos neutralizantes UI/ml sueroAntitoxina BetaAntitoxina épsilonCor-1-0 5 5Cor-1-1
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DISTRIBUCIÓN Y EVOLUCIÓN DEL GANA
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