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560LOZANO, J.M. • ABECIA, A. & FORCADA, F.MATERIAL Y MÉTODOSA mediados de noviembre se colocaron esponjasintravaginales impregnadas de progestágeno a 30ovejas de raza Rasa Aragonesa. Desde el momentode la colocación de la esponja hasta el final delexperimento fueron divididas en dos lotes equilibradosen peso vivo y condición corporal que recibían550 g de concentrado (79% de cebada, 15% desoja, 0,8% de sal, 1,2 % de fosfato bicálcico y 4%de suplemento vitamínico-mineral) y 800 g de pajade cebada/día, cubriendo 1,5 veces las necesidadesdiarias de mantenimiento (1,5 X M) (lote alto, A,n=15), o bien 100 g de pienso y 500 g de paja (0,5X M) (lote bajo, B, n=15).Desde un día tras la retirada de la esponja (día 0)hasta el final del experimento se realizó una extraccióndiaria de sangre con el fin de determinar losniveles de progesterona a lo largo del ciclo sexual.No se detectaron celos en 2 ovejas del lote A y 5 dellote B, por lo que éstas no fueron consideradas enlos resultados del experimento.El día 9 tras las cubriciones, previa anestesiageneral inducida con tiopental sódico, se realizaronlaparatomías en 7 ovejas del lote A y 5 del lote B,realizándose las siguientes operaciones: 1. Seregistró la tasa de ovulación y se extrajo una muestrade ambas venas ováricas para el análisis de progesterona.2. Los cuernos uterinos fueron entonceslavados para la recuperación de los embriones existentes,los cuales fueron contados y clasificadossegún su morfología. Si tras un primer lavado elnúmero de embriones no coincidía con el númerode cuerpos lúteos existentes se realizaba un segundolavado para asegurar la recuperación de todos losembriones. Los embriones fueron cultivados enEagle’s minimum essential medium (MEM) durante24 horas en 5% CO 2 , para determinar la producciónin vitro de interferon-tau (IFN τ ). 3. Las ovejasfueron entonces ovariectomizadas y los cuerposlúteos se disecaron y cultivaron durante 2 horas enmedio TCM-199 para determinar la secreción deprogesterona in vitro (Abecia et al. , 1995). 4. Finalmente,las ovejas fueron sacrificadas, recogiéndosemuestras de endometrio de ambos cuernos. Unamuestra de cada cuerno fue congelada a -20ºC parael análisis del contenido endometrial de progesterona.También se cultivaron muestras de tejidoendometrial en medio Ham’s F-12 modificadodurante 24 h en 5% CO 2 , con el fin de determinarla secreción in vitro de prostaglandina F 2α (PGF 2α ).Todos estos procedimientos se repitieron en lasovejas restantes (6 A y 5 B) el día 15 tras las cubriciones.Tabla 1. Contenido endometrial de progesterona(ng/mg tejido), concentración de progesterona en venaovárica (ng/ml), producción in vitro de progesteronapor tejido luteal (ng/mg de tejido/h) y secreción deprostaglandinas por tejido endometrial (ng/mg proteína)los días 9 y 15 de gestación en ovejas consumiendo1,5 (A) ó 0,5 (B) veces las necesidades diariasde mantenimiento. Media error±error estandar.Análisis de progesterona, PGF 2α e IFN tLa extracción del contenido endometrial de progesteronase realizó mediante el método descrito porAbecia et al. (1996). Las concentraciones de progesteronafueron determinadas por RIA mediantekits comerciales (BioMerieux SA, Marcy L’Etoile,France). La sensibilidad del ensayo fue de 0,05ng/ml. Los coeficientes de variación intra e interensayofueron de 7,6% y 9,1% respectivamente.La concentración de PGF 2α en el medio de cultivose analizó mediante un kit comercial de EIA para elanálisis de PGF 2α (Cayman Chemical Co., AnnArbor, MI, USA). Las muestras fueron analizadasen un solo ensayo, con un coeficiente de variaciónintraensayo de 8,4%. La concentración de IFN τ enel medio de cultivo fue analizada mediante dos técnicas:por una parte se determinó la actividad antiviraly por otra se analizó mediante EIA para IFN τ .Análisis estadísticoEl efecto de la alimentación sobre el peso vivo yel estado de reservas, sobre la secreción de IFN τ porlos embriones, producción de PGF 2α por el tejido