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510BARRIOS, B. et al.Tabla 2.- Porcentajes de espermatozoides ovinos con la membrana integra a los 60 minutos de habersido sometidos a choque-térmico en ausencia y presencia de cada una de las subfracciones delplasma seminal ovino (G1-G8).G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8Vc 60 15 11 11 — 23 17 19 17Vp 60 20 15 24 — 32 56 38 26Vi 75 75 72 — 80 71 77 73%R 8,3 6,2 21,3 — 15,7 72,2 32,7 16,0Los porcentajes de recuperación obtenidosindican que sólo G6, G7 y G3 son capaces de recuperarel daño de membrana. Así, el mayor %R ,72%,corresponde a la subfracción G6. La valoración densitométricade G6, muestra que está constituida por10 bandas proteicas entre 15 y 60 kDa (Fig.4B) . Elalto porcentaje de las dos proteínas de 15 y 25 kDa,del 93%, sugiere que el efecto reparador observadose deba a una de las mismas. Asimismo, la subfracciónG3 con un %R del 21,3 esta constituida por 15bandas distintas (Fig.4B), aunque el 77% del contenidoproteico se corresponde con dos proteínas de12 y 24 kDa, análogos a las de G6. Este hecho coincidecon la existencia de una única banda mayoritariaen G7, 95% del total, de 12 kDa (Fig.4B).Estos resultados circunscriben el efecto reparador,de los daños producidos por frío sobre los espermatozoidesovinos, a estas dos proteínas del plasmaseminal de 12 y 24 kDa. Si bien, la presencia mayoritariade la proteína de 24 kDa en G6 y el mayorefecto observado la señalarían como principal responsable.La futura purificación de estas dos proteínas permitiráel análisis diferencial de su acción y la posibilidadde producir anticuerpos contra las mismas,hecho que facultaría: a) el aislamiento de las mismasen cantidad suficiente, para su estudio como hipotéticosagentes crioprotectores, b) especificar suorigen biosintético y c) el testaje diferencial de supresencia en moruecos con diferente capacidad fertilizante.AGRADECIMIENTOSEste trabajo ha sido financiado gracias a los proyectosDGICYT AGF 97 y DGA P03/96. Se agradecea S. Morales su asistencia técnica en la recogidadel semen.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICASAMANN, R.P.; HAMMERSTEDT, R.H.; VEERA-MACHANENI, D.N.R., 1993. The Epididymisand Sperm Maturation - A Perspective. ReprodFert Develop, 5, 361-381.BOUE, F.; BLAIS, J. ; SULLIVAN, R., 1996. Surfacelocalization of P34H, an epididymal protein,during maturation, capacitation, and acrosomereaction of human spermatozoa. Biol Reprod 54,1009-1017.BRADFORD, M., 1976. A rapid and sensitivemethod for the quantitation of microgram quantitiesof protein utilizing the principle of dye binding.Analyt. Biochem. 72, 248-254.BROOKS, D.E., 1990. Biochemistry of the maleaccessory glands in Marshall’s Physiology ofReproduction (G. E. Lamming eds.) pp.569-690Churchill Livingstone, London.CALVETE, J.; SANZ, L.; ENSSLIN, M.; TOP-FERPETERSEN, E., 1996. Sperm surface proteins.Reprod Domest Anim 31, 101-105.CAMEO, M.; DAWIDOWSKI, A.; SANJURJO, C.,GONZÁLEZ-ECHEVERRÍA, F.; BLAQUIER,J.A. (1990) “Changes in sperm-specific antigensduring apididymal maturation” in Gamete Interaction.pp.129-141 Wiley-Liss, New York.DACHEUX, J.L.; VOGLMARY, J.K. (1983).“Sequence of sperm cell differenciation and itsrelationship to exogenous fluid proteins in the ramepididymis. Biol. Reprod. 29, 1033-1047.GARCÍA-LÓPEZ, N.; OLLERO, M.; MUIÑO-BLANCO, T. ; CEBRIÁN-PÉREZ, J.A., 1996.“A dextran swim-up procedure for separation ofhighly motile and viable ram spermatozoa fromseminal plasma”. Theriogenology 46, 141-151.HAMMERSTEDT, R.H., 1993. “Maintenance ofBioenergetic Balance in Sperm and Prevention ofLipid Peroxidation - A Review of the Effect on
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PRODUCCIÓN OVINA Y CAPRINAN.º XXI
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