MDCK-MRP2 - Dkfz

Proteomanalyse
Forschungsschwerpunkt B
Funktionelle und Strukturelle Genomforschung
In Kooperation mit F. Schütt, Universität Heidelberg
Übermäßige Akkumulation von Lipofuscin in postmitotischen
retinalen Pigmentepithelzellen führt zu verschiedenen Formen
der Erblindung einschließlich der altersabhängigen
Degeneration der Makula (ARMD), welche derzeit die häufigste
Ursache für Erblindung bei Patienten jenseits der 50 in
den Industrieländern ist. Um die Rolle der Lipofuscin Akkumulation
besser verstehen zu lernen, wurden Lipofuscin Granula
aus humanen retinalen Pigmentepithelzellen analysiert. Die
isolierten Proteine wurden durch 2D-Gelelektrophorese
aufgetrennt und mit MALDI-TOF Massenspektrometrie und
nanoLC-ESI Massenspektrometrie analysiert. Die gefundenen
Proteine umfassen Cytoskelettproteine, Proteine der
Phototransduktion, Stoffwechselenzyme, mitochondriale
Enzyme, Ionenkanalproteine und Chaperone. [6]
In Kooperation mit: D.Schadendorf, DKFZ, P.Sinha, LKH
Klagenfurt, Österreich
Chemoresistente Zelllinien von Magencarcinom, Pankreascarcinom,
Fibrosarkom und Melanom wurden zusammen
mit ihren thermoresistenten Entsprechungen etabliert. Mit
Hilfe der Proteomanalyse wurden auf der Basis von 2D-
Gelelektrophorese und Bildanalyse resistente Melanomzellen
untersucht. Um Unterschiede zu finden, wurde das Proteinmuster
parentaler Melanomzelllinien mit dem der resistenten
Sub-Zelllinien verglichen. Es konnten eine Anzahl von
Proteinen identifiziert werden, welche in chemoresistenten
Melanomzelllinien überexprimiert waren. [4, 17]
Der Gebrauch dreidimensionaler Zellkultur Modelle, sogenannter
multizellulärer Tumorsphäroide, ist ein besonderer
Ansatz in der experimentellen Krebsforschung, da Sphäroide
sowohl strukurell als auch funktional in vivo Tumoren ähnlich
sind. Zellen die in Sphäroiden wachsen zeigen Veränderungen
im Zellzyklus, der Induktion von Apoptose und
Differenzierung und können Multidrogenresistenz ausbilden.
Die Proteinexpression humaner colorektaler Krebszellen
sowohl als Monolayerkultur als auch als Sphäroidkultur wurde
mit Hilfe der Proteomanalyse untersucht. Eine Bildanalyse
ergab die Überexpression von 3 Cytokeratin18-Fragmenten.
Cytokeratin18 ist als Zielmolekül einer Caspase-vermittelten
Spaltung während der Apoptose beschrieben worden.
Andere hochregulierte Proteine in Sphäroiden beinhalten
Calretikulin Precursor , eine Rho-GDP-Dissoziierungsinhibitor
Variante, einige Cytokeratine und Peroxyredoxin 4. Einige
dieser Proteine wurden schon bisher mit Chemoresistenz
und apoptotischen Phänomenen in Verbindung gebracht.
[5]
Publikationen (* = externer Koautor)
[1] Drobny M*, Schnölzer M, Fiedler S, Lüttge U*, Fischer-
Schliebs E*, Christian AL*, Ratajczak R* (2002) Phenotypic subunit
composition of the tobacco (Nicotiana tabacum L.) vacuolartype
H(+)-translocating ATPase. Biochim Biophys Acta. 2002
19;1564(1):243-255.
[2] Gassler N*, Schnölzer M, Rohr C*, Helmke B*, Kartenbeck J,
Grünewald S*, Laage R*, Schneider A*, Kränzlin B*, Bach A*,
Otto HF*, Autschbach F*. (2002) Expression of calnexin reflects
Paneth cell differentiation and function. Lab Invest 82(12),
1647-1659
[3] Hofmann I, Schnölzer M, Kaufmann I, Franke WW (2002)
Symplekin, a constitutive protein of karyo- and cytoplasmic particles
involved in mRNA biogenesis in Xenopus laevis oocytes. Mol
Biol Cell 13(5), 1665-1676.
B100
Zentrale Proteinanalytik
[4] Poland J*, Schadendorf D, Lage H*, Schnölzer M, Celis JE*,
Sinha P* (2002) Study of therapy resistance in cancer cells with
functional proteome analysis. Clin Chem Lab Med 40(3), 221-
234.
[5] Poland J*, Sinha P*, Siegert A*, Schnölzer M, Korf U,
Hauptmann S* (2002) Comparison of protein expression profiles
between monolayer and spheroid cell culture of HT-29 cells revealed
fragmentation of CK18 in three-dimensional cell culture.
Electrophoresis 23(7-8), 1174-1184.
[6] Schütt F*. Ueberle B, Schnölzer M, Holz F*, Kopitz J* (2002)
Proteome analysis of lipofuscin in human retinal pigment epithelial
cells. FEBS Lett. 25, 528(1-3), 217-221.
[7] Zatloukal K*, Stumptner C*, Fuchsbichler A*, Heid H,
Schnölzer M, Kenner L*, Kleinert R*, Prinz M*, Aguzzi A*, Denk
H* (2002) p62 is a common component of cytoplasmic inclusions
in protein aggregation diseases. Am J Pathol 160(1), 255-263.
[8] Bauer H*, Gromer S*, Urbani A, Schnölzer M, Schirmer RH*,
Müller HM* (2003) Thioredoxin reductase from the malaria mosquito
Anopheles gambiae. Eur J Biochem. 270(21),4272-4281.
[9] Brandt O, Feldner J, Stephan A, Schröder M, Schnölzer M,
Arlinghaus HF, Hoheisel J, Jacob J (2003) PNA microarrays for
hybridisation of unlabelled DNA samples. Nucleic Acids Res.
31(19):e119.
[10] Das T*,. Sen A*, Kempf T,. Pramanik SR*, Mandal C*,
Mandal C* (2003) Induction of glycosylation in human C-reactive
protein under different pathological conditions. Biochem.J.
373(2), 345-355.
[11] Dormeyer W, Dorr A, Ott M, Schnölzer M (2003) Acetylation
of the HIV-1 Tat protein: an in vitro study. Anal Bioanal Chem
376, 994-1005.
[12] Gassler N*, Schneider A*, Kopitz J*, Schnölzer M,
Obermüller N*, Kartenbeck J, Otto HF*, Autschbach F* (2003)
Impaired expression of acyl-CoA-synthetase 5 in epithelial tumors
of the small intestine. Hum Pathol. 34(10),1048-52.
[13] Gassler N*, Bohn J*, Schnölzer M, Scheuerer J*, Obermüller
N*, Otto HF*, Autschbach F*. (2003) Distinct expression of
calnexin in major human salivary glands. Histol Histopathol
18(1),121-127.
[14] Kaehlcke K, Dorr A, Hetzer-Egger C, Kiermer V, Henklein P,
Schnölzer M, Loret E, Cole PA, Verdin E, Ott M (2003) Acetylation
of Tat defines a CyclinT1-independent step in HIV transactivation.
Mol Cell 12, 167-176.
[15] Kuhn J*, Müller S*, Schnölzer M. Kempf T, Schön S*,
Brinkmann T*, Schottler M*, Götting, C*, Kleesiek K* (2003)
High-level expression and purification of human xylosyltransferase
I in High Five insect cells as biochemically active form.
Biochem Biophys Res Commun. 19; 312(3): 537-44.
[16] Ratajczak R*, Pfeifer T*, Drobny M*, Schnölzer M, Lüttge
U* (2003) Molecular evidence for the occurrence of H(+)-transporting
V-ATPase subunit D and two different forms of subunit E
in leaves of the obligate CAM species Kalanchoe daigremontiana.
Biologia Plantarum 46(1), 13-21.
[17] Sinha P*, Poland J*, Kohl S*, Schnölzer M, Helmbach H,
Hütter G*, Lage H*, Schadendorf D (2003) Study of the development
of chemoresistance in melanoma cell lines using proteome
analysis. Electrophoresis 24, 2386-2404.
[18] Straub BK, Boda J, Kuhn C, Schnölzer M, Korf U, Kempf T,
Spring H, Hatzfeld M*, Franke WW (2003) A novel cell-cell junction
system: The cortex adhaerens mosaic of lens fiber cells. J
Cell Sci 116, 4985-4995.
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
157