MDCK-MRP2 - Dkfz

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Forschungsschwerpunkt F
Infektion und Krebs
[20] Freyschmidt, E-J, Alonso, A, Hartmann, G*, Gissmann, L
(2004) Freyschmidt Activation of dendritic cells and induction of T
cell responses by human papillomavirus type 16 (HPV 16) L1/E7
chimeric virus-like particles is enhanced by CpG ODN or sorbitol
Eingereicht zur Veröffentlichung
[21] Lucy, J.C.*, Smyth, L.J.C.*, Van Poelgeest, M.I.E.*,
Davidson, E.J.*, Kwappenberg, K.M.C.*, Burt, D.*, Sehr, P.,
Pawlita, M., Man, S.*, Hickling, J.C.*, Fiander, A.N.*, Tristram,
A.*, Kitchener, H.C.*, Offringa, R.*, Stern, P.L.* and van der
Burg, S.H.* (2004). Immunological responses in women with
HPV16 associated anogenital intraepithelial neoplasia (AGIN) induced
by heterologous prime-boost HPV16 oncogene vaccination.
Eingereicht zur Veröffentlichung.
[22] Min Dai, M.*, Clifford, G.M.*, le Calvez, F.*, Castellsagué,
X.*, Snijders, P.J.F.*, Pawlita, M., Herrero, R.*, Hainaut, P.*,
and Franceschi, S.* for the IARC Multi-center Oral Cancer Study
Group. (2004) Human Papillomavirus Type 16 and TP53 Mutation
in Oral Cancer: Matched Analysis of the IARC Multi-centric Study.
Cancer Res. Im Druck.
Arbeitsgruppe Molekulare Biologie und
Anwendung rekombinanter Foamyviren
M. Löchelt, P. Bastone, F. Romen, A. Schwantes,
V. Geiselhart, R. Wirtz, N. Kirchner
In Zusammenarbeit mit Prof. Dr. Uwe Truyen, Univ. Leipzig;
Profs. Mauro Bendinelli und Mauro Pistello, Univ. Pisa (Italien);
Dr. Christian Weiss, Bayer AG Leverkusen; Dr. Matthias Frech,
Merck AG, Darmstadt; Dr. Joachim Weikel, Tiergesundheitsdienst
Bayern, München; Dr. Ingo Ortlepp, Univ. Heidelberg; Dr. Ali
Saib, CNRS, Paris (Frankreich); Allison German, Bristol University
(UK).
Aufgrund der Apathogenität der bekannten Spumaretrooder
Foamyviren (FV) und wegen spezieller Charakteristika
ihrer Replikations-Strategie, haben diese komplexen Retroviren
ein besonderes Potential als neuartige virale Vektoren
für den Gentransfer und zur Expression von Impf-Antigenen.
In der Arbeitsgruppe, die im Frühjahr 2003 in die
Abteilung F020 „Genomveränderung und Carcinogenese“
gewechselte, werden entsprechende Studien durchgeführt.
Die Untersuchungen basieren primär auf dem felinen
Foamyvirus (FFV), da im Modell der FFV-infizierten oder FFV-
Vektor-transduzierten Katzen die Biologie von Foamyviren
und die Anwendbarkeit und biologische Sicherheit entsprechender
Vektoren experimentell untersucht werden kann.
Die Kooperationen mit externen Partnern werden weiterhin
genutzt, die Replikation, den Zell- und Organtropismus,
sowie die Übertragung des FFV exemplarisch für die Familie
der Foamyviren zu untersuchen.
1. Foamyvirus basierte Vektoren
Initial wurden Replikations-kompetente FFV Vektoren konstruiert,
die das heterologe Gfp Protein in Zellkulturen effizient
exprimieren [2]. Während langfristiger serieller
Passagierung der Vektoren wurde das heterologe Markergen
eliminiert, die Vektoren weisen eine nur begrenzte
genetische Stabilität auf [2]. Parallel wurde gezeigt, dass
das parentale klonierte FFV Genom für vollständig Replikations-kompetente
FFV Partikel kodiert: in Zellkulturen und
experimentell infizierten Katzen repliziert kloniertes und
nicht-kloniertes FFV mit vergleichbarer Kinetik [2, 4]. FFV-
Vektoren, die neutralisierende Epitope des Katzen-Calicivirus
exprimierten wurden konstruiert und für Vakzinierungs-
Experimente verwendet. Die Vektoren replizierten in Katzen
und induzierten eine spezifische (primär zelluläre und
mukosale) Immunität in den behandelten Katzen. Die Katzen
wurden zwar noch vom felinen Calicivirus infiziert, die
Symptome der Infektion und die Ausscheidung des Calici-
Abteilung F020
Genom-Veränderungen und Carcinogenese
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
virus waren in den immunisierten Katzen jedoch signifikant
reduziert [4]. Diese Studien belegen erstmals, dass
Foamyviren als Vakzinevektoren in immunkompetenten Tieren
erfolgreich eingesetzt werden können.
Auf diesen Ergebnissen aufbauend wurden selbst-inaktivierende
FFV Vektoren konstruiert und charakterisiert [5]:
die alleinige Deletion des viralen LTR-Promoters reicht nicht
aus, das Auftreten Replikations-kompetenter Revertanten
zu verhindern. Deshalb werden derzeit weitere Gene der
Vektoren deletiert und die entsprechenden Vektoren funktionell
charakterisiert.
2. Struktur und Funktion des Foamyvirus Env
Oberflächen-Glykoproteins
Das Foamyvirus-Env Glykoprotein ist essentiell für die Freisetzung
und Funktion viraler Vektoren. Hierfür verantwortlich
ist ein bei anderen Retroviren unbekanntes N-terminales
Protein, das „Env Leader Protein Elp“. Elp ist als Signalpeptid
für die korrekte Expression und Prozessierung erforderlich
und weist zudem essentielle morphogenetische Determinanten
auf. Diese für die Env-Gag Wechselwirkung essentiellen
Funktionen werden in weiterführenden Projekten
identifiziert und charakterisiert [3]. Ein vertieftes Verständnis
der für den Env-Einbau und die Morphogenese erforderlichen
Prozesse kann zur Veränderung der Zellspezifität und
Pseudotypisierung foamyviraler Vektoren verwendet werden.
In weiteren Projekten der Arbeitsgruppe werden verschiedene
Aspekte der Wechselwirkung zwischen Foamyviren
und der infizierten Wirtszelle bzw. dem infizierten Organismus
untersucht [1, 6 - 8]. In Mittelpunkt dieser und anderer
erst kürzlich initiierter Projekte steht die Frage, welche
zellulären Faktoren für die virale Replikation erforderlich sind
und wie die Funktion(en) antiviraler zellulärer Proteine durch
virale Mechanismen inaktiviert werden.
Publikationen (* = externer Koautor)
[1] Kido, K., A. Doerks, M. Löchelt, and R. M. Flügel (2002).
Identification and functional characterization of an intragenic
DNA binding site for the spumaretroviral trans-activator in the
human p57Kip2 gene. J. Biol. Chem. 277:12032-12039.
[2] Schwantes, A., *I. Ortlepp, and M. Löchelt (2002). Construction
and functional charac-terization of feline foamy virus-based
retroviral vectors. Virology 301: 53-63.
[3] Geiselhart, V., A. Schwantes, P. Bastone, *M. Frech, and M.
Löchelt (2003). Characterization of the feline foamy virus Env
leader protein and the N-terminal Gag domain. Virology 310:
235-244.
[4] Schwantes, A., *U. Truyen, *J. Weikel, *C. Weiss, and M.
Löchelt (2003). Application of chimeric feline foamy virus-based
retroviral vectors for the induction of antiviral immunity in cats.
J. Virol. 44: 7830-7842.
[5] Bastone, P. and M. Löchelt. (2004). Kinetics and characteristics
of replication-competent revertants derived from self-inactivating
foamy virus vectors. Gene Therapy. 11: 465-473.
[6] *Weikel, J., M. Löchelt, and *U. Truyen (2003). Demonstration
of feline foamy virus in eperimentally infected cats by immunohistochemistry.
J. Vet. Med. A 50: 415-417.
[7] Löchelt, M. (2003). Foamy virus transactivation and gene expression.
Curr. Top. Microbiol. Immunol. 277: 27-61.
[8] Bastone, P., *U. Truyen, and M. Löchelt (2004). Potential of
zoonotic transmission of non-primate foamy viruses to humans.
J. Vet. Med. B 50: 417-423.