MDCK-MRP2 - Dkfz

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Forschungsschwerpunkt F
Infektion und Krebs
die Anwesenheit von DNA genitaler Helferviren (Papillomviren,
Zytomegalieviren) getestet.
Papillomvirus-DNA konnte in keinem Fall nachgewiesen werden
(K. Zscheppang, unveröffentlicht).
Das zur Familie der Herpesviren gehörende humane Zytomegalievirus
(HCMV) spielt als häufigste Ursache kongenitaler
Virusinfektionen im Kontext von Schwangerschaft und
fetaler Entwicklung eine wesentliche Rolle. Die klinischen
Konsequenzen einer fetalen HCMV-Infektion sind individuell
sehr unterschiedlich und wurden bislang nur in Kohorten
schwangerer Frauen untersucht, die zuvor anhand eines
serologischen HCMV-Befundes als Risikoschwangerschaften
eingestuft wurden. In unserer Studie wurden somit zum
ersten Mal in einer nicht selektierten Kohorte schwangerer
Frauen die Prävalenz der in-utero-Infektion mit HCMV sowie
die anti-HCMV-Antikörper-Prävalenzen bestimmt (C. Wenig,
zur Publikation eingereicht).
Die 403 Amniozenteseproben wurden mittels nested PCR
auf das Vorhandensein von HCMV-DNA getestet, wobei
pro Patientin jeweils zwei Aspirate vorlagen: das erste, welches
auch mütterliche Zellen (darunter Muskelzellen der
Bauchdeckenmuskulatur und des Uterus, Bindegewebs- und
Fettzellen) enthält und normalerweise nach der Amniozentese
verworfen wird, sowie das zweite Fruchtwasseraspirat
aus der Amnionhöhle, welches theoretisch nur embryonale
Zellen enthält. In dieser nicht selektierten Kohorte
schwangerer Frauen war eine in-utero-Infektion mit HCMV
mit einer Prävalenz von 3% selten.
Es ergaben sich somit keine Hinweise auf eine Helferfunktion
von HCMV oder HPV für AAV.
Schwerwiegende klinische Befunde im Zusammenhang mit
einem HCMV-DNA-positivem Fruchtwasserbefund wurden
nicht beobachtet. Virologisch überraschend war, dass
HCMV DNA mit einer größeren Häufigkeit im ersten Fruchtwasseraspirat
nachgewiesen wurde. Demnach konnte erstmalig
eine Persistenz von HCMV in mütterlichen Zellen
schwangerer Frauen gezeigt werden.
Die Serumproben (von der Mutter zum Zeitpunkt der
Amniozentese und bei der Entbindung sowie Nabelschnurblut
des Neugeborenen) wurden auf HCMV-spezifische IgGund
IgM-Antikörper untersucht. Hinsichtlich der serologischen
Untersuchungen wurden mit einer Prävalenz der
HCMV-spezifischen IgG-Antikörper von 46,6 % zum Zeitpunkt
der Amniozentese die Ergebnisse vorangegangener
Studien bestätigt.
b. AAV-Infektion und männliche Infertilität
Die Infektion des weiblichen Genitaltrakts deutet auf eine
sexuelle Übertragung von AAV hin. Deshalb untersuchten
wir Proben aus dem männlichen Genitalbereich auf die Anwesenheit
von AAV. Virale DNA wurde in ca. einem Drittel
der Ejakulatproben infertiler Männer nachgewiesen [*Rohde,
V. et al. (1999). Fertil. Steril. 72, 814-816], insbesondere
bei Vorliegen eines pathologischen Spermiogramms, während
AAV extrem selten bei „normalem“ Spermienbefund
detektierbar war. Auch infektiöses AAV konnte aus dem
Ejakulat isoliert werden. Außerdem konnte AAV-DNA auch
in Hodenbiopsien infertiler Männer (26%) nachgewiesen
werden, was eine Infektion der Samenzellen während der
Spermatogenese nahe legt [Erles, K. et al. (2001) Hum.
Reprod. 16, 2333-2337]. In Ejakulaten von Kontrollpersonen
(fertile Männer) war AAV nur ganz selten detektierbar.
Im Gegensatz zu AAV-DNA war DNA der AAV-Helferviren
(Papillomviren, Zytomegalieviren) ebenso häufig in normalen
wie in pathologischen Samenproben nachzuweisen.
Abteilung F010
Tumorvirologie
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
Diese Befunde unterstützen die Vermutung einer sexuellen
Übertragung des Virus und weisen außerdem auf eine mögliche
Rolle der AAV-Infektion bei der männlichen Infertilität
hin [3].
In Kooperation mit der Universitäts-Frauenklinik wurden weitere
Untersuchungen zur genitalen AAV-Infektion bei infertilen
Paaren durchgeführt. In 23% der Ejakulate und in
17% der Zervix-Abstriche dieser Paare wurde AAV-DNA
nachgewiesen. Bei 6% der Paare wurde virale DNA bei
beiden Partnern detektiert. Aus 5 (18,5% von 27 untersuchten
AAV-DNA-positiven) Ejakulaten konnten infektiöse
AAV-Partikel angezüchtet werden. In 2 der 5 Fälle war
AAV-DNA im Abstrich der Partnerinnen nachweisbar. Bei 4
Paaren, die beide eine genitale AAV-Infektion hatten (AAV-
DNA-Nachweis) wurde bei zwei der Männer auch infektiöses
AAV im Sperma gefunden.
Damit konnte erstmals die Möglichkeit der sexuellen Übertragung
(durch Sperma) von AAV direkt nachgewiesen
werden.
Nach ersten Analysen scheint die Anwesenheit von AAV-
DNA keinen Einfluß auf die intrinsische Motilität der Spermien
und keinen negativen Einfluß auf den Spermatozoen-Cervixmucus-Penetrationstest
(SCMPT-Test) zu haben. AAV
wird offenbar nicht durch den Cervix-Mucus-Barriere „zurückgehalten“,
womit die Möglichkeit einer Infektion des Endometrium
oder ggf. eines Ovums gegeben ist.
Zur Frage der AAV-Latenz in Hodengewebe wurden
Orchiektomiepräparate von Patienten, die wegen eines
Prostata-Karzinoms operiert worden waren, auf AAV-DNA
untersucht, die 8 von 24 Proben nachgewiesen werden
konnte [4]. In ersten Untersuchungen konnte für 3 Proben
eine chromosomale Integration der viralen DNA aufgezeigt
werden. Die DNA aus 2 Proben wurde kloniert
und die Virus-DNA-Zell-DNA - Übergänge sequenziert. Es
zeigte sich, dass eine Integration in der AAVS1-Region auf
Chromosom 19 vorlag [4], wie dies bisher für die Integration
von AAV-DNA in Zellkultur beschrieben ist. Weitere,
vorläufige Analysen zeigten, daß die AAV-DNA in offenbar
als vollständiges Genom integriert vorliegt [S. Hoecker, unveröffentlicht].
Mit diesen Untersuchungen konnte somit
zum ersten Mal eine Integration von AAV-DNA in menschlichem
Gewebe (nach „natürlicher“ Infektion) nachgewiesen
werden.
Zur Frage eines möglichen Einflusses der AAV-Infektion auf
Hodenzell- bzw. Spermienreifung wurden AAV-infizierte
Hodenzelllinien in vitro untersucht. In Experimenten mit
Leydig- und Sertoli-Zellinien der Maus (TM3 bzw. TM4)
konnte gezeigt werden, dass diese Zelltypen mit AAV infizierbar
sind, und dass - in Abhängigkeit von der Infektionsmultiplizität
- die Infektion zu einer Reduzierung der Zellproliferation
und des Zellwachstums führt, auch nach Stimulation
der Zellen mit FSH. Dagegen scheint die Testosteronproduktion
von Leydig-Zellen durch AAV-Infektion gesteigert
zu werden [Till et al., in Vorbereitung].
Die relativ hohe Prävalenz von AAV-DNA im Samen unfruchtbarer
Männer und in Hodengewebe konnte somit weiter
bestätigt werden. Das Vorkommen infektiöser Virionen im
Samen belegt die Vermutung einer sexuellen Übertragung
des Virus und wirft die Frage auf, ob es zu einer Übertragung
auf die Eizelle kommen könnte, und ob dies mit der Entstehung
einer Schwangerschaft vereinbar ist.
Möglicherweise könnte eine AAV-Infektion des frühen Embryos
zu Nidationsproblemen oder zu frühen Aborten führen.
Hinweise auf einen solchen AAV-Effekt hatten wir in