MDCK-MRP2 - Dkfz

Forschungsschwerpunkt E
Innovative Krebsdiagnostik und -therapie
J.Immunol. 1999, 163:3771). Im letzten Jahr nun dehnten
wir unsere Untersuchungen auch auf murine Granulozyten
aus und zeigten erstmals, daß auch in dieser quantitativ
bedeutsamsten Leukozytenfraktion die zytosolische
Arginase I durch TH2 Zytokine induziert wird (M. Munder
et al., Manuskript in Vorbereitung).
Die Regulation der Arginase im humanen Immunsystem
unterscheidet sich fundamental vom murinen System. Durch
Auftrennung humaner Leukozyten in die einzelnen zellulären
Linien wurde klar, dass das Enzym selektiv in Granulozyten
(PMN) exprimiert wird (M. Munder, Manuskript in Vorbereitung).
ImGegensatz zum murinen System ist es in den
PMN bereits konstitutiv mit hoher Enzymaktivität vorhanden.
Wir konnten ferner die subzelluläre Lokalisation aufklären
und zeigen, dass die humane Granulozyten-Arginase
in den azurophilen Granula exprimiert ist. Eine mögliche
Funktion im Rahmen der Phagozytose und Zytotoxizität
humaner Granulozyten wurde ebenfalls aufgeklärt (M.
Munder, Manuskript in Vorbereitung). Neben diesen zellbiologischen
Untersuchungen studierten wir an einer Kohorte
von 50 Patienten nach allogener Stammzelltransplantation
die Regulation der humanen PMN Arginase im Rahmen
verschiedener inflammatorischer Zustände (G.
Doschko, Manuskript in Vorbereitung). Augenblicklich interessieren
wir uns für weitere mögliche Funktionen der humanen
PMN Arginase sowie physiologische Induktoren und
Suppressoren des Enzyms sowie die assoziierten intrazellulären
Signaltransduktionswege.
2. Regulatorische humane CD4+CD25+ T-Zellen
im Rahmen der allogenen Stammzelltransplantation
und Graft-versus-Host Erkrankung
M. Munder, S. Karakhanova, T. Luft, M. Görner,
M. Schneider
Kooperationspartner: L. Nicholson (Universität Bristol, England,
UK); A. D. Ho (Medizinische Klinik V, Heidelberg)
Zusatzfinanzierung: Amgen
Die allogene Stammzelltransplantation ist für verschiedene
hämatologische oder genetische Erkrankungen eine wichtige
und oftmals die einzige kurative Therapieoption. Eine
der wesentlichen Komplikationen der Methode besteht in
der Abstoßungsreaktion der transplantierten Zellen gegenüber
dem Empfänger (Graft-versus-Host Erkrankung, GvHD).
Je nach Konditionierung und HLA-Kompatibilität zwischen
Spender und Empfänger entwickeln 25-75% der transplantierten
Patienten eine GvHD, welche nicht nur zu einer
wesentlichen Einschränkung an Lebensqualität führt,
sondern auch mit beträchtlicher Mortalität verbunden ist.
Man geht davon aus, daß die GvHD durch eine Aktivierung
alloreaktiver T-Lymphozyten des Spenders ausgelöst wird,
wobei die genauen Pathomechanismen nach wie vor unklar
sind. In den letzten Jahr wurde im murinen und humanen
Immunsystem eine suppressorische CD4+ T-Zellpopulation
charakterisiert, welche sich durch konstitutive Expression
von CD25 auszeichnet. In verschiedenen murinen
Krankheitsmodellen wurde gezeigt, dass ein Verlust der
CD4+CD25+ T-Zellen zu Auto- oder Alloimmunität führt.
Wir analysierten daher an einer Kohorte von 30 Patienten
im ersten Jahr nach allogener Stammzelltransplantation
engmaschig (alle 14 Tage) mittels Durchflusszytometrie das
T-Zell-Kompartiment im peripheren Blut. Es zeigte sich, daß
das Auftreten von GvHD mit einer Reduktion der
CD4+CD25+ Suppressorzellen assoziiert ist (M. Schneider,
Manuskript in Vorbereitung). In einem weiteren Pilotprojekt
Klinische Kooperationseinheit E160
Molekulare Hämatologie/Onkologie
wurde klar, dass möglicherweise auch eine Störung der
Funktionalität der CD4+CD25+ Zellen mit GvHD vergesellschaftet
ist (S. Karakhanova, Manuskript in Bearbeitung).
Die CD4+CD25+ Zellen stellen daher möglicherweise ein
potentes zelluläres Therapeutikum zur gezielten Immunsuppression
bei Auto- und Alloimmunität dar. Wir begannen
mit der Etablierung eines Protokolls zur optimalen ex vivo
Expansion dieser physiologisch anergen T-Zellpopulation.
Im Rahmen der oben skizzierten Analyse der allogen transplantierten
Patienten wurde ferner eine umfangreiche
Materialdatenbank aufgebaut, welche als Grundlage zukünftiger
Untersuchungen zur Immunrekonstitution nach
Stammzelltransplantation dienen wird.
Transgene Tiermodelle
J. Schenkel
Zusammenarbeit mit: Prof. Dr. Angel Alonso DKFZ, Dr. Jörn Coers
Univ. Basel, Schweiz, Dr. Richard Jäger Univ. Bonn, Dr. Kirsten
Kabsch DKFZ, Dr. Svetlana Karakhanova DKFZ, Michaela Hipp
DKFZ, Dr. Andrea Mohr Univ. Ulm, Prof. Dr. Radek Skoda Univ.
Basel, Schweiz, PD Dr. Johannes Vogel Univ. Zürich, Schweiz, PD
Dr. Markus A. Weigand Univ. Heidelberg, Dr. Ralf Zwacka Univ.
Ulm
Transgene Tiermodelle zur Hämatopoese
In Kooperation mit J. Coers, S. Karakhanova und R. Skoda
Zum besseren Verständnis der Rolle des hämatopoetischen
Potentials von Stammzellen haben wir eine Vielzahl von
transgenen Tieren entwickelt, um die während der Differenzierung
aktivierten Vorgänge zu verstehen. Derzeit sind
wir in Heidelberg dabei, die für diese Modelle erforderlichen
Mehrfachmutanten zu etablieren.
Um die Rolle des Thrombopoetinrezeptors in Mausmodellen
zur essentiellen Thrombozytose zu studieren, haben wir
verschiedene punktmutierte Rezeptorgene in entsprechende
Mausmutanten eingefügt, die Analyse dieser Tiere ist
derzeit in Arbeit. Ein anderer Ansatz versucht Veränderungen
im Splicing des Rezeptorgens mit Krankheiten zu assoziieren,
hierzu haben wir auch Mausmodelle etabliert, die
derzeit getestet werden.
Die Rolle des E2 Proteins bei der Regulation der Aktivität
des humanen Papilloma Virus Typ 11 (HPV-11)
In Koperation mit A. Alonso, K. Kabsch und M. Hipp
Ziel dieses Vorhabens ist, den Einfluss des E2 Proteins des
HPV-11 auf die Genexpression der Wirtszelle zu verstehen.
Mit Hilfe eines Reportergenkonstrukts wurde bereits
die Aktivität des HPV-11 untersucht (Schenkel et al., 1999;
Protopapa et al., 1999). Dabei erhielten wir eine spezifische
Expression sowie eine Aktivierung nach verschiedenen
Stimuli, nur die Reportergenaktivität war nicht in allen
zu erwartenden Zielgeweben zu finden. Das dürfte u.U.
daran liegen, daß in diesem Modell weder natürliches Wirtsnoch
Virusprotein vorhanden sind.
Um die Rolle von HPV-11 E2 in vivo untersuchen zu können,
wurde das entsprechende Gen unter Kontrolle des
humanen Ubiquitin C Promotors zur Generierung transgener
Tiere verwendet. Wir erhielten mehrere Foundertiere, erwartungsgemäß
wurden in einer Vielzahl von Geweben in
der RT-PCR ein Signal gefunden, nicht das Transgen exprimierende
Gewebe wurden nicht nachgewiesen, eine Quantifizierung
des Genprodukts steht noch aus.
Zum immunochemischen Nachweis des Transgens HPV-11
E2 haben wir in Kaninchen Antiseren generiert, die gegen
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
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