MDCK-MRP2 - Dkfz

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Forschungsschwerpunkt F
Infektion und Krebs
MAPKAP-K2 und Hsp27 vermittelt und die Behandlung der
Zellen mit Stresskinase p38 Inhibitoren führt zu einer Inhibition
der EGFR Aktivierung. Diese Ergebnisse deuten darauf
hin, dass die Stresskinase p38 wahrscheinlich “oberhalb”
des Rezeptors liegt. Der unmittelbare Effekt einer solchen
Aktivierung ist ein Einschalten einer Reihe von Signalkanälen,
die zu einer Proliferation der Keratinozyten führt.
Ein wichtiger Punkt bei der Analyse solcher Kinasekaskaden
ist die Identifizierung der ersten Signale und die Antwort
auf die Frage, ob die verschiedenen Signale ein gleiches
Phosphorylierungsmuster hervorrufen. Um diese Frage zu
beantworten, wurden eine Reihe von Experimenten durchgeführt
mit dem Ziel, die Analytik des Systems zu verfeinern.
EGF Rezeptoren in aktiviertem Zustand wurden isoliert und
eine Methode wurde entwickelt, um die Phosphorylierungsmuster
des Rezeptors zu analysieren. Die Methode, die auf
einer Analyse von Peptidfragmenten im MALDI-TOF Verfahren
beruht, wurde mittels Ligand-spezifischer Aktivierung
der EGFR getestet und für die weiteren Analysen verwendet
[4].
Unsere Experimente ergaben, dass Stress in Keratinozyten
zu einer verstärkten Synthese von Arachidonsäure (AA)
führte (Abb. 2). Diese Zunahme wird durch eine Aktivierung
der Phospholipase A2, die schnell nach Stress-Behandlung
phosphoryliert wird, ermittelt. Diese Phosphorylierung
ist abhängig von der Aktivierung der MAP Kinasen erk1/2,
aber nicht der Stresskinase p38. Ein Gesamtbild kann dadurch
entwickelt werden, dass osmotischer Stress bei Keratinozyten
zu einer verstärkten Aktivierung von p38 führt.
Diese Aktivierung mündet in einer Phosphorylierung des
EGF-Rezeptors, die die entsprechende Signalkette (ras-raferk1/2)
einschaltet. Endergebnis ist eine Phosphorylierung
der PLA2 und die Abgabe von AA in das Kulturmedium [4].
Publikationen (* = externer Koautor)
[1] Kabsch, K., and Alonso, A. 2002. The human papillomavirus
type 16 E5 protein impairs TRAIL- and FasL-mediated apoptosis in
human keratinocytes by different mechanisms. J. Virol. 76,
12162-12172.
[2] Kabsch, K., and Alonso, A. 2002. The human papilomavirus
type 16 (HPV16) E5 protein sensitizes human keratinocytes for
apoptosis. Oncogene 21, 947-953.
[3] Cartin, W., and Alonso, A. 2003. The human papillomavirus
type 2a (HPV2a) E5 protein localizes to the Golgi apparatus and
modulates signal transduction. Virology 314, 572-579.
[4] Alonso, A., and Reed, J. 2002. Modelling of the Human
Papillomavirus Type 16 E5 Protein. Biochim. Biophys. Acta, 1601,
9-18.
[5] Cheng, H., Kartenbeck, J., Kabsch, K., X. Mao, M. Marques,
and Alonso, A. 2002. Stress kinase p38 mediates EGFR
transactivation by hyperosmolar concentrations of sorbitol. J.
Cell. Physiol. 192, 234-243.
[6] Rodriguez, I., *Kazskin, M., Marqués, M. M., Kabsch, K.,
Mao, X., and Alonso, A. 2002. Hyperosmotic stress induces activation
of cytosolic phospholipase A2 in HaCaT cells by an epidermal
growth factor receptor-mediated process. Cell. Signal.14,
839-848.
[7] Salek, M., Alonso, A., Pipkorn, R., and Lehman, W. D. 2003.
Analysis of protein tyrosine phosphorylation by nanoelectrospray
ionization high-resolution tandem mass spectrometry and tyrosine-targeted
product ion scanning. Anal. Chem. 75, 2724-
2729.
F050
Zelldifferenzierung
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003