MDCK-MRP2 - Dkfz

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Forschungsschwerpunkt F
Infektion und Krebs
und X-preC) weit stärker war als für früh synthetisierte (X).
Die Kopiezahl polyadenylierter viraler RNA wurde durch die
Lamivudinbehandlung nur gerinfügig beeinflusst. Folgende
Schlüsse lassen sich ziehen:
1. Die tatsächlichen Viruspartikel-Zahlen während der Lamivudintherapie
werden akurat nur über die Bestimmung
früh sythetisierter Sequenzbereiche erfasst.
2. Lamivudin bewirkt eine Akkumulation von partikel-assoziierten
HBV-DNA-RNA Hybridmolekülen (arretierte Replikationsintermediate).
3. In Partikeln verpackte HBV-RNA ist nicht polyadenyliert
[5].
Das Hepatitis-B-Virus Core-Protein, ein neuer
Ansatzpunkt für die gezielte antivirale Therapie
Gegenwärtig sind für die Therapie der HBV-Infektion nur
Interferone und nukleosidische Inhibitoren der HBV-Polymerase
zugelassen. Der Wert dieser Therapien wird eingeschränkt
durch die unerwünschten Nebenwirkungen der
Interferone und der Entwicklung von HBV-Polymerasemutanten.
In Zusammenarbeit mit der Bayer AG wurden nichtnukleosidische
Inhibitoren der Nucleocapsid-Reifung beschrieben,
die in-vitro anti-virale Aktivität zeigten. Die zur
Klasse der Heteroarylpyrimidine (HAP) zählenden Inhibitoren
besitzen offenbar einen hochspezifischen antiviralen Wirkmechanismus:
Interaktion mit dem HBV-Core-Protein, die
damit verbundene Blockade der Kapsidbildung und die damit
verbundene deutliche Reduktion der Stabilität des Core-
Proteins [6, 7].
Publikationen (*= externer Koautor)
[1] Bannasch, P. and Schröder, C.: Pathogenesis of primary liver
tumours. In: “Pathology of the Liver”,R. N. M. Max Sween, P. P.
Anthony, P. J. Scheuer, T.A.D. Burt, B. C. Portman (eds.),
Churchill Livingstone, New York, Edinburgh, London, Melbourne
2002, pp. 777-826.
[2] Schröder, C.H.: Studying the progression of chronic infection
with the hepatitis B virus has a bearing on diagnosis and
therapy: a more personal look at research that benefitted from
the communication with collegues in China. JFMMU 24, 1825-
1827 (2003)
[3] *Reinhold, U., Schröder, C.H. Diagnostische Bedeutung frei
zirkulierender Nukleinsäuren. Deutsches Ärzteblatt 99, A1224-
1228 (2002)
[4] Zhang, W., Hacker, H.J., Mildenberger, M., Su, Q., Schröder,
C.H.: Detection of HBV RNA in Serum of Patients. In Methods in
Molecular Medicine, 95: Hepatitis B and D Protocols, 1, eds
Hamatake, R.K., Lau, Y.N. Humana Press Inc., Totowa, NJ 2004,
pp. 29-40 (2004)
[5] Zhang, W., Hacker, H.J.,* Tokus, M., *Bock, T., Schröder,
C.H.: Patterns of circulating hepatitis B virus serum nucleic acids
during lamivudine therapy.Journal of Medical Virology 71, 24-30
(2003)
[6] *Deres, K., Schröder, C.H., *Paessens, A., *Goldmann, S.,
Hacker, H.J., et al., 2003 Inhibition of Hepatitis B Virus replication
by drug-induced depletion of nucleocapsids. Science 299, 893-
896 (2003)
[7] Hacker, H.J., *Deres, K., Mildenberger, M., Schröder, C.H.:
Antivirals interacting with hepatitis B virus core protein and core
mutations may misdirect capsid assembly in a similar fashion.
Biochemical Pharmacology 66, 2273-2279 (2003)
Abteilung F060
Virus-Wirtszell-Wechselwirkungen
Molekulare Aspekte der Papillomvirus-assoziierten
Tumorentstehung: Integration der viralen
DNA und Veränderungen zellulärer Gene
E. Schwarz, C. Lohrey, O. Pless, F. Lehmann,
C. Mensger, F. Fathinejad
In Zusammenarbeit mit Prof. Dr. Kumiko Eiguchi, Universidad del
Salvador, Buenos Aires, Argentinien; Prof. Dr. Matthias Dürst,
Gynäkologische Molekularbiologie, Frauenklinik der Universität
Jena; Dr. Markus Hoffmann, HNO-Uniklinik, Kiel; Dr. Franz X.
Bosch, HNO-Uniklinik, Heidelberg; Dr. Irmgard Schwarte-
Waldhoff, Medizinische Klinik, Ruhr-Universität, Bochum.
Zusatzfinanzierung: HGF-Strategiefonds „Viral regulatory
factors“, WTZ-Projekt mit Argentinien
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
Die Krebsentstehung ist ein in mehreren Stufen ablaufender
komplexer Prozess, der durch genomische Instabilität sowie
durch Mutationen von Proto-Onkogenen und Tumorsuppressorgenen
verursacht wird. Bei einigen Tumorarten, insbesondere
beim Zervixkarzinom (Gebärmutterhalskrebs),
spielen Infektionen mit humanpathogenen Papillomviren
(HPV) wie HPV16 und HPV18 und die dadurch bedingte
Expression der viralen Onkogene E6 und E7 eine entscheidende
Rolle. Ein wichtiger Schritt in der Kanzerogenese ist
die Integration der Papillomvirus-DNA in das Genom der
Wirtszelle. Unseren Arbeiten liegt die Hypothese zugrunde,
dass die Integration der Papillomvirus-DNA bei einigen Karzinomen
nicht nur die deregulierte Überexpression der viralen
Onkogene, sondern auch eine Mutation essentieller zellulärer
Regulatorgene bewirkt (Insertionsmutagenese). Dabei
sollte es sich vorrangig um Tumorsuppressorgene handeln,
die durch die Integration inaktiviert werden. Unsere Arbeiten
sind darauf ausgerichtet, durch HPV-Integration veränderte
zelluläre Gene zu identifizieren und ihre Funktionen
in normalen Zellen sowie ihre Rolle in der Tumorentstehung
zu entschlüsseln.
HPV-Integration und APM-1-Gen.
Die Integration der Papillomvirus-DNA erfolgt in unterschiedliche
Genomregionen; deshalb ist der Integrationsort für
jeden Tumor ein hoch spezifisches Merkmal. Die viralen Onkogene
E6 und E7 werden über viral-zelluläre Hybridtranskripte
exprimiert, deren 3’-zelluläre Sequenzen vom jeweiligen
Integrationsort abstammen und für dessen Identifizierung
benutzt werden können. Die Vermutung einer Mutagenese
zellulärer Tumorsuppressorgene durch Integration
von Papillomvirus-DNA haben wir zunächst am Beispiel der
Zervixkarzinom-Zelllinie ME180 untersucht. Grund für die
Auswahl dieser Linie war der Befund, dass in ME180-Zellen
das durch integrierte Papillomvirus-DNA mutierte Chromosom
in zweifacher Kopie vorliegt, während das normale Chromosom
verloren gegangen ist. In ME180-Zellen haben wir in
der HPV-Integrationsregion und als Teil der viral-zellulären
Fusionstranskripte das vorher unbekannte Gen APM-1 entdeckt,
das für ein BTB-Zinkfingerprotein mit wachtumsinhibierenden
Eigenschaften kodiert [1]. Die Bezeichnung
APM leitet sich ab von „Affected by Papillomavirus DNA
integration in ME180 cells“. Das Gen liegt auf Chromosom
18 in der Region q21.
Genexpressionsanalysen haben gezeigt, dass das APM-1-
Gen in normalen Geweben exprimiert wird, dass aber bei
ungefähr einem Drittel der untersuchten Karzinom-Zelllinien
unterschiedlicher Herkunft (Gebärmutterhals, Darm, Lunge,
Blase, Pankreas) und bei einem Teil der primären Zervixkarzinome
keine oder nur eine sehr schwache APM-1-Expression
nachweisbar ist. Die Transkription des APM-1-Gens wird
von mindestens drei, sehr weit voneinander entfernt liegen-