MDCK-MRP2 - Dkfz

Forschungsschwerpunkt E
Innovative Krebsdiagnostik und -therapie
Immunogenität einer Vakzine mit Peptid-beladenen
dendritischen Zellen in der Früh- und
Spätphase nach autologer Stammzell-TPL
T. Luft, O. Christensen*, H. Goldschmidt*,
D. Schadendorf # , A.D. Ho*
* Medizinische Klinik und Poliklinik V; # D070, DKFZ
Klinische Phase I-II Vakzinestudien mit Peptid-beladenen
dendritischen Zellen (DC) zeigten, dass 10-30% aller Patienten
potente Immunreaktionen bis hin zu (vereinzelten)
kompletten Remissionen ihrer malignen Erkrankung entwickeln
können. Trotzdem profitiert die Mehrzahl der Patienten
nicht von dieser aufwendigen Therpie. Diese geringe
Wirksamkeit steht im Widerspruch zu zahlreichen in vitro
und murinen in vivo Studien, in welchen sich DC als die
potentesten Antigen-präsentierenden Zellen (APC) zur
Induktion einer T-Zell-vermittelten Immunantwort erwiesen.
Wir vermuten, dass die Diskrepanz zwischen experimenteller
und klinischer Wirksamkeit verursacht wird
a) durch Verwendung migratorischer DC, die nicht zur Sekretion
von IL-12p70 befähigt sind, und
b) durch das Fehlen eines systemischen, pro-inflammatorischen
Milieus, welches normalerweise bei viralen und bakteriellen
Infektionen beobachtet wird. Da Tumoren ihr Mikromilieu
selbst immunsuppressiv konditionieren, ist die Umgebung
des Tumors sicher nicht in der Lage, die durch
eine Vakzine expandierten T-Zellen zur Reifung zu bringen.
Hinweise für eine inkomplette Reifung Peptid-spezifischer
CTL wurden bereits bei HIV-Patienten gefunden. Die
Perforinexpression von CTL, die durch eine DC-Vakzine
expandiert wurden, ist bisher nicht untersucht. Jedoch
benötigen CTL für ihre terminale Reifung IL-10 oder IL-
12p70, zwei Zytokine, die von den in bisherigen Vakzinestudien
verwendeten DC nicht sezerniert werden. Die Studie
des vorliegenden Antrags verwendet DC, die für 6h
mit CD40Ligand und IFN-γ aktiviert wurden und nach T-
Zell-Kontakt zur Sekretion dieser Zytokine in der Lage sind.
Andererseits verlangt eine massive Expansion Peptid-spezifischer
CTL ein systemisches, pro-inflammatorisches Milieu,
wofür v.a. präklinische Studien mit adoptivem Transfer
von CTL Hinweise erbrachten. Die frühe Phase der
lymphozytären Rekonstitution (nach autologer oder allogener)
SZT scheint die Expansion zytotoxischer T-Zellen besonders
zu begünstigen. Diese Expansion ist initial oligoklonal,
was auf eine Antigen-spezifische Expansion der CTL hinweist.
Die hier vorgelegte Studie soll die Frage beantworten,
ob sich die Immunogenität einer DC-Vakzine in der
Frühphase nach autologer SZT von einer Vakzine in der
Spätphase unterscheidet.
Studiendesign
- 30 Patienten mit Multiplem Myelom (MM) im Stadium III
werden mit autologen DC vakziniert.
Randomisation:
a) 4 Wochen oder b) 6 Monate nach Hochdosis-Chemotherapie
und nachfolgender autologer SZT.
- Herstellung der DC-Vakzine aus autologen Monozyten
im GMP-Labor des DKFZ-Partners.
- Aktivierung der DC nach unserem eigenen Protokoll: 6
h CD40L-Monomere und IFN-γ.
- DC werden mit tumorassoziierten Peptiden beladen:
MAGE-A2 (KVAELVHFL, 112-120; FLWGPRALV, 271-
Klinische Kooperationseinheit E160
Molekulare Hämatologie/Onkologie
279), LAGE-1 (SLLMWITQV, 155-167), Influenza-
Kontrollpeptid (GILGFVFTL, 58-66).
- Studienendpunkte: Toxizität der Vakzine und Zahl und
Funktion Peptid-spezifischer CTL im peripheren Blut.
- Immunologische Evaluation nach 3 Vakzinierungszyklen
(3 wöchige Zyklen) aus einem Leukapherisat: FACS-Analyse
mit Tetrameren, intrazelluläre Expression von Perforin
und Granzym B, Oberflächenmarker, ELISpot und ELISA.
Bisher sind in zwei Probeläufen Leukapherisate von Patienten
mit MM erfolgreich im GMP-Labor der Arbeitsgruppe
D070 (Prof. D. Schadendorf) aufbereitet worden, die Studie
soll im Jahr 2004 15 Patienten rekrutieren. Diese Studie
ist ein erster Schritt hin zu nachfolgenden Studien mit
neuen Peptidantigenen.
Polymorphe HLA-DP-abgeleitete Peptide - neue
Vakzineantigene für Fremdspender-Blutstammzelltransplantationen?
E. Rodionova, M. Zöller # , A.D. Ho*, T. Luft
* Medizinische Klinik und Poliklinik V; # D060, DKFZ
Parallel zur Entwicklung klinischer Vakzinestudien nach SZT
sucht unserer Gruppe nach neuen Tumor-assoziierten Antigenen.
Dabei sind die HLA-DP-Allele vielversprechende
Zielstrukturen, die sich bei den meisten allogenen Fremdspender-SZT
zwischen Spender und Empfänger unterscheiden.
Wir untersuchen die Bedeutung von HLA-A2-bindenden
Peptiden der polymorphen Regionen dieser Allele als
potentielle Antigene für CTL-Antworten bei Graft-versus-
Leukämie (GvL) und Graft-versus-Host-Disease (GvHD)
Reaktionen sowie als Antigene für zukünftige Vakzinestudien.
Ähnlich den Minor Histokompatibilitätsantigenen HA-1 und
HA-2 ist auch die Expression der HLA-Klasse II Moleküle im
Wesentlichen auf hämatopoetische Zellen und ihre Abkömmlinge
begrenzt. Auch Leukämie- und Lymphomzellen
exprimieren diese Moleküle. Eine CTL-vermittelte Immunreaktion
gegen Empfängerallele sollte daher nach allogener
SZT eine GvL unterstützen und nur geringe Nebenwirkungen
haben.
Wir haben die HLA-A2-bindenden Peptide der polymorphen
Regionen aller HLA-DP-Allele identifiziert und für einige
dieser Peptide Bindungsfähigkeit und Immunogenität
in vivo nachgewiesen. Zur Zeit arbeiten wir an der Klonierung
Peptid-spezifischer CTL, um die Expression dieser Peptide
an der Oberfläche von B-Lymphozyten zu untersuchen.
Da die analogen Peptide der verschiedenen HLA-DP-Allele
ein weites Spektrum von HLA-A2-Bindungsaffinitäten zeigen,
hoffen wir, immunogene Peptide zu identifizieren, die
spezifisch auf hämatopoetischen und malignen Zellen des
Empfängers exprimiert werden. Diese Peptide könnten
mögliche Antigene für zukünftige Vakzinestudien darstellen.
Die Relevanz dieser Peptide im Kontext einer GvL bzw.
GvHD-Reaktion wird anhand der Patientenproben unserer
Materialbank untersucht.
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
355