MDCK-MRP2 - Dkfz

248
Forschungsschwerpunkt D
Tumorimmunologie
maler Wachstumsfaktor Rezeptor 2) bindet. Eine Überexpression
des Rezeptors tritt bei etwa 25-30% der Patientinnen
mit Mammakarzinom auf und ist assoziiert mit einer
schlechteren Prognose des Krankheitsverlaufs. Die Firstline
Therapie des metastasierten Mammakarzinoms mit
HER2 Überexpression erbrachte in 26% der Fälle ein objektives
Ansprechen auf die Antikörperbehandlung.
Eine interessante neuere Therapiestategie basiert auf der
Zielrichtung zytotoxischer T-Lymphozyten (CTL) auf Tumorzellen
mittels bispezifischer Antikörper. Bei den bispezifischen
Antikörpern handelt es sich um Hybridmoleküle, die zwei
unterschiedliche Antigenbindungsstellen besitzen. Sie können
entweder durch chemische Verknüpfung von zwei
monovalenten Fab´-Antikörperfragmenten oder eleganter
durch Zellfusion zweier Hybridome zu einem Hybrid-
Hybridom, welches bispezifische Antikörper sezerniert, erhalten
werden. Die Spezifität zytotoxischer T-Zellen ist durch
ihren Antigenrezeptor bestimmt, der auf der Zellmembran
zusammen mit dem CD3 Molekül exprimiert wird. Physiologischerweise
erkennen CTL Fremdantigene (genauer:
Peptidbruchstücke derselben) nur in Assoziation mit Strukturen
des Haupthistokompatibilitäts-Komplexes (MHC). In
grundlegenden Untersuchungen konnte gezeigt werden,
daß sich CTL unter Umgehung ihrer genetisch determinierten
Spezifität durch bispezifische Antikörper auf beliebige
Zielzellen lenken lassen. Dabei wird durch die eine Valenz
des Hybridantikörpers (zumeist anti-CD3) die T-Zelle aktiviert
und durch die zweite Valenz die Zielzelle an die T-
Zelle gebunden, von der sie nachfolgend lysiert wird. Die
Selektivität der zytotoxischen Reaktion wird ausschließlich
von der Spezifität des Antikörpers bestimmt und ist nicht
MHC-restringiert.
Bispezifische Antikörper zur Behandlung von
B-Zellneoplasien:
Wir haben Hybrid-Hybridome hergestellt, welche Antikörper
der Spezifität CD19xCD3 sezernieren. Wir haben uns
auf das CD19 Molekül als Zielantigen konzentriert, da es
die breiteste Expression während der B-Zelldifferenzierung
aufweist und auf praktisch allen Leukämie und
Lymphomzellen vorkommt, die sich von den B-Lymphozyten
herleiten. Der CD19xCD3 bispezifische Antikörper wurde
einer umfassenden präklinischen Evaluation unterzogen,
um seine in vitro Wirksamkeit zu belegen. Insbesondere
konnten präaktivierte T-Lymphozyten nach Zugabe von
bispezifischem CD19xCD3 Antikörper sowohl auf allogene
als auch auf autologe Tumorzellen von Patienten mit cALL
(common acute lymphoblastic leukemia) und B-CLL (chronic
lymphocytic leukemia) gelenkt werden und diese effizient
lysieren.
In letzter Zeit haben wir uns auf die Erprobung einer neuen
Art von Effektorzellen konzentriert, nämlich der Zytokininduzierten
Killerzellen (CIK-Zellen). Hierbei handelt es sich
um T-Lymphozyten, die den natürlichen Killerzellen (NK-
Zellen) sehr ähnlich sind, indem sie eine MHC unabhängige
spontane Zytotoxizität gegen verschiedene Tumorzellen
aufweisen. Eine Besonderheit dieser Zellpopulation, die
etwa 1% der peripheren weißen Blutzellen ausmacht, ist
die Fähigkeit, in Gegenwart eines Gemisches aus IFN-γ,
IL-2 und des Antikörpers OKT3 in Gewebekultur bis tausendfach
zu expandieren. Die Kombination der CIK-Zellen
mit dem CD19xCD3 bispezifischen Antikörper erbrachte eine
dramatische Steigerung der Apoptoserate in autologen
B-CLL Proben. Die GMP-gemäße Vermehrung der CIK-Zellen
von Patienten wurde inzwischen von unseren klinischen
Kooperationspartnern etabliert. Gegenwärtig bereiten wir
Abteilung D050
Molekulare Immunologie
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
eine Studie vor, welche die Wertigkeit mit Antikörpern
beladener CIK-Zellen bei CLL Patienten evaluieren soll.
Bispezifische Antikörper zur Behandlung von
Karzinomen:
In einem zweiten Projekt haben wir Hybrid-Hybridome der
Spezifitäten HEA125xCD3 und HEA125xCD264 hergestellt.
Der Antikörper HEA125 reagiert mit dem Membranglykoprotein
Ep-CAM, das auf praktisch allen Karzinomzellen aber
auch auf normalen epithelialen Zellen des Menschen (allerdings
in geringerer Konzentration) exprimiert ist. Eine besondere
Eigenschaft dieses Antigens liegt darin, daß es auch
auf bösartig veränderten Tumorzellen niemals verloren geht,
während viele andere Membranmarker während der Krebsentwicklung
nicht mehr nachweisbar sind.
Patientinnen mit Ovarialkarzinom entwickeln im Endstadium
der Erkrankung häufig eine tumorbedingte Bauchwassersucht
(maligner Aszites). Sie haben nicht nur eine begrenzte
Lebenserwartung sondern auch eine stark eingeschränkte
Lebensqualität. Der Aszites, der in der Regel ein
Volumen von mehreren Litern aufweist, führt häufig zu
schweren körperlichen Beeinträchtigungen wie Atemeinschränkung
und Verlegung des Darmtrakts. Dies macht die
wiederholte Punktion mit Ablassen der Aszitesflüssigkeit
erforderlich, die allerdings oft binnen Tagen oder Wochen
nachgebildet wird. Immunologische Zusatzbehandlungen
scheinen eine geeignete palliative Möglichkeit für diese Gruppe
von Patientinnen zu eröffnen, für die es kaum therapeutische
Alternativen gibt.
Bisher wurden 11 Patientinnen mit fortgeschrittenem und
konventionell nicht mehr therapierbarem Ovarialkarzinom
und massiver Aszitesbildung in eine klinische Studie aufgenommen,
die wir zusammen mit der Frauenklinik der Universität
Heidelberg durchführen. Das Behandlungsprotokoll
schreibt die möglichst vollständige Abpunktion der Aszitesflüssigkeit
und die nachfolgende Gabe von 1 Milligramm
bispezifischen Antikörper HEA125xOKT3 in die Bauchhöhle
vor. Die Behandlung wird viermal in wöchentlichem Abstand
wiederholt. Alle Patientinnen sprachen klinisch auf die Behandlung
an. Bei 9 Patientinnen kam es zu einem völligen
Verschwinden der Aszitesproduktion, während 2 Patientinnen
eine signifikante Rückbildung des Flüssigkeitsvolumens
aufwiesen. Bemerkenswerterweise zeigten 8 Patientinnen
eine Stabilisierung beziehungsweise einen Rückgang des
Tumormarkers CA125 im Serum. Die beobachteten Nebenwirkungen
waren für die Patientinnen tolerabel und bestanden
vor allem in Fieber, Schüttelfrost, Blutdruckabsenkung
und allergischen Hautreaktionen, die durch eine Begleitmedikation
gut behandelbar waren. Als Ergebnis der Studie
können wir zusammenfassen, daß alle Patientinnen zumindest
im Sinne einer Verbesserung der Lebensqualität von
der lokalen Antikörpertherapie profitiert haben, ohne belastende
Nebenwirkungen in Kauf nehmen zu müssen.
In Spätstadien des Mammakarzinoms tritt häufig - ähnlich
wie beim Ovarialkarzinom - ein maligner Erguß auf, der in
der Pleurahöhle lokalisiert ist und die Atmung stark behindert.
Nach bereits erteiltem positivem Votum der örtlichen
Ethik-Kommission steht der Beginn der klinischen Erprobung
des HEA125xOKT3 Antikörpers als lokale Immuntherapie
bei dieser Indikation unmittelbar bevor.
Alpha-Immuntherapie von Non-Hodgkin-
Lymphomen
Die Alpha-Immuntherapie stellt eine experimentelle Form
der Radioimmuntherapie dar, welche Antikörper als Carrier-
Moleküle einsetzt, um eine an den Antikörper konjugierte