MDCK-MRP2 - Dkfz

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Forschungsschwerpunkt F
Infektion und Krebs
Zusammensetzung der durch Inkubation von CVLPs mit
polyklonalen oder monoklonalen Antikörpern entstandenen
Immunkomplexe (unterschiedliche stöchiometrische
Verhältnisse von Antigen zu Antikörpern) - zu- oder abnimmt
[4]. Außerdem zeigten sich adjuvante Effekte von
unmethylierten CG Dinukleotiden (CpG Motive) bzw. (bisher
nicht bekannt) von hypotonischem Stress (Behandlung
der DCs mit Sorbitol) [20]. Wir untersuchen jetzt die
der Sorbitol-bedingten Aktivierung zugrunde liegenden Mechanismen.
Die Ergebnisse werden auch Aufschluss darüber
geben, ob eine solche hypotonische Behandlung bei
der ex vivo Beladung von DCs zur Tumortherapie eingesetzt
werden kann.
Evaluierung einer experimentellen
Vakzinierungsstrategie gegen HIV.
V. Bosch, M. Cornitescu, D. Holtkotte, T. Pfeiffer,
T. Pisch, S. Sparacio
In Zusammenarbeit mit Dr. O. T. Keppler (Universität Heidelberg)
Zusatzfinanzierung: Wilhelm Sander-Stiftung (T.P.), H. W. & J.
Hector Stiftung (M.C.)
Wir haben erstmalig zeigen können, dass Membranfusion
zwischen einzelnen retroviralen Partikeln, die jeweils virale
bzw. zelluläre Fusionsrezeptoren eingebaut haben, möglich
ist, und dass die so entstandenen fusionierten Strukturen
infektiös sind (Virology, 271:248, 2000) und [17].
Die konzeptionelle Basis unserer Vakzinierungsstrategie
betrifft nun die mögliche Induktion kreuz-neutralisierender
Antikörper gegen HIV-1 durch Präparationen von solchen
miteinander fusionierenden Pseudovirionen, die CD4/Korezeptor
bzw. HIV-Env (Wildtyp oder Mutanten) inkorporiert
haben. Durch Terminierung des Fusionsprozesses in
einem intermediären Stadium (entweder chemisch oder
durch die Verwendung spezifischer Env-Mutanten) sollen
Env-Epitope, die im nativen Env-Glykoprotein nicht
immunogen sind, exponiert und angereichert werden.
Verschiedene Präparationen von Pseudovirionen sollen dann
im Tiermodell (normale Mäuse, huCD4/Korezeptortransgene
Ratten) auf ihre Fähigkeit getestet werden, eine
Immunantwort gegen HIV-Env zu induzieren.
Die bisherigen Arbeiten betrafen die nähere Charakterisierung
pseudoviraler Membranfusion und die Herstellung,
Analyse und Optimierung von Pseudovirionen-Präparationen
sowie erste Immunisierungen in nicht transgenen
Mäusen. In nun laufenden Immunisierungs-Experimenten
und Analysen werden entsprechende Präparationen miteinander
fusionierender Pseudovirionen auf ihre Fähigkeit
getestet, neutralisierende oder kreuzneutralisierende Antikörper
zu induzieren.
Rolle der cytoplasmatischen C-terminalen
Domäne des HIV-Glykoproteins in der Infektion
and Replikation.
V. Bosch, D. Holtkotte, T. Pfeiffer
Im Gegensatz zu den meisten membran-umhüllten Viren
enthalten lentivirale Oberflächenproteine (Env-Proteine)
sehr lange C-terminale cytoplasmatische Domänen (CT)
(von über 100 Aminosäuren), die für die Virusreplikation in
vivo absolut notwendig sind. Außerdem enthält die
transmembranale Domäne (TMD) von Env eine konservierte
geladene Aminosäure (Arginin), die normalerweise nicht
in TMDs vorkommt. Bisher ist jedoch noch unbekannt,
welche essentiellen Rollen durch diese Regionen vermit-
Abteilung F020
Genom-Veränderungen und Carcinogenese
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
telt werden. Wir verfolgen verschiedene Ansätze, um einen
Einblick in diese Vorgänge zu bekommen.
Wir haben zeigen können, dass Mutanten-Viren mit
Trunkationen in Env-CT oder mit einer ausgetauschten
TMD-Region einen Zell-spezifischen Replikationsdefekt zeigen,
d.h. sie können in bestimmten T- Zellen replizieren,
aber in anderen nicht, obwohl dort die mutierten
Glykoproteine funktionsfähig sind (induzieren Membranfusion)
und in die Hülle von freigesetzten Virionen eingebaut
werden. Unsere jetzigen Untersuchungen zielen zum
einen darauf hin, den blockierten Schritt in der Replikation
dieser Viren zu identifizieren und somit Information zur
Funktion des HIV Env-CTs zu erhalten. Darüber hinaus verfolgen
wir mehrere andere Ansätze, um die Effekte der
Expression von Env-TMD und Env-CT auf die Zelle (Interaktionen
mit zellulären Proteinen, Effekte auf zelluläre Genexpression)
zu untersuchen.
Antikörper Immunantwort gegen humane
Papillomviren (HPV) bei HPV-Infektion und HPVassoziierten
Erkrankungen
M. Pawlita, L. Gissmann, A. Hoefer, S. Krüger,
U. Reidel, P. Sehr, T. Waterboer
In Zusammenarbeit mit J. Dillner (University of Malmö,
Schweden), S. Franceschi (IARC, Lyon, Frankreich), R. Herrero
(IARC, Lyon, Frankreich / Proyecto Epidemiológico Guanacaste,
Costa Rican Foundation for Health Sciences, San José, Costa
Rica), P. Widschwendter and R. Höpfl (Univeritäts-Frauenklinik
Innsbruck, Austria), M. Lehtinen (National Public Health Institute,
Helsinki, Finland), E. Davidson and P. Stern (Paterson Institute
for Cancer Research, Manchester, UK), A. Kaufmann (Universitäts-Frauenklinik,
Jena)
Persistierende Infektion mit bestimmten Typen humaner
Papillomviren (HPV) ist assoziiert mit der Entwicklung mehrerer
bösartiger proliferativer Erkrankungen wie
Gebärmutterhalskrebs (Zervixcarcinom) und anderen anogenitalen
Krebsformen, Untergruppen von Kopf-Hals-Plattenepithelcarcinomen
(HNSCC). Das Projekt basiert auf der
Annahme, dass methodische Verbesserungen bei der HPV-
Antikörper-Bestimmung notwendige Voraussetzung sind für
eine detaillierte Analyse der Immunantwort bei HPV-Infektion
und HPV-assoziierten Erkrankungen. Ziel ist serologische
Marker zu definieren für Diagnostik und/oder Prognostik
HPV-assoziierter Erkrankungen und zum Monitoring bei
der HPV-Impfstoffentwicklung.
Wir haben eine Serie von Enzym-Immunotesten (ELISA)
entwickelt zur Messung von Antikörpern gegen die Proteine
E1, E2, E4, E6, E7 und L1 der mucosalen HPV-Typen
16, 18 (die häufigsten HPV-Typen in Zervixcarcinomen)
and 6b. Die ELISA verwenden komplette, lösliche
rekombinant exprimierte HPV-Proteine als Antigen und
zeichnen sich durch hohe Sensitivität und HPV-Typspezifität
aus [15] und erlauben systematische seroepidemiologische
Studien.
In mehreren Fall-Kontrollstudien konnte eine sehr starke
Assoziation von Antikörpern gegen die Onkoproteine E6
und E7 der HPV-Typen 16 und 18 mit invasiv wachsendem
Gebärmutterhalskrebs [16] und HPV-positiven HNSCC [6]
nachgewiesen werden. Bei Zervixcarcinom findet die
Serokonversion wahrscheinlich erst bei invasivem Tumorwachstum
statt, sodaß diese Antikörper für eine Diagnostik
von Krebsvorstufen nicht geeignet erscheinen [7]. E6/
E7-Antikörperstatus zum Zeitpunkt der Tumordiagnose hat
keinen Einfluß auf den Krankheitsverlauf [16]. Bei HNSCC