MDCK-MRP2 - Dkfz

Forschungsschwerpunkt F
Infektion und Krebs
fekt und kann deshalb als Reaktionsmechanismus des Virus
auf die Apotoseversuche der Zelle verstanden werden [2].
Eine wichtige Beobachtung war, dass die Expression von
E5 die Zellen gegen Stressfaktoren sensibilisiert, möglicherweise
durch eine Veränderung der Membranfluidität, die
durch die Inkorporation des viralen Proteins in die Membran
verursacht wird [3].
Ein weiterer Effekt des E5 Proteins ist eine Verringerung
der Expression von MHC KlasseI Molekülen an der Membran.
In Zellen, die transient mit HPV2a E5 transfiziert worden
waren, konnten wir beweisen, dass der Gehalt an Membrangebundenen
MHC Klasse I stark reduziert war. Interessanterweise
war die Gesamtmenge an MHCs in E5-exprimierenden
und Kontrolltransfektanten gleich, so dass wahrscheinlich
ein defekter Transport des Komplexes an die Membran für
den Effekt verantwortlich war [4].
Diese Ergebnisse deuten daraufhin, dass E5 nicht in der
Lage ist, Zellen zu transformieren oder malignisieren, sondern
eher zu “entstabilisieren”. Diese “Entstabilisierung” wird
zum einen durch die Verhinderung der Apoptose infizierter
Zellen erreicht, zum anderen durch eine verringerte Membranexpression
der MHC Moleküle und, dadurch bedingt,
eine reduzierte immunologische Antwort auf die Präsenz
des viralen Proteins.
Transaktivierung der EGF Rezeptoren
A. Alonso, I.G. Bravo, X. Mao, K. Leykauf,
A. LaVecchia
In Kooperation mit Prof. Dr. J. Kartenbeck, Prof. Dr.
W.D. Lehmann, DKFZ.
Neben der Ligand-abhängigen Aktivierung der EGF-Rezeptoren
wurde in den letzten Zeiten eine Ligand-unabhängige
Aktivierung beschrieben. Diese Aktivierung erfolgt in menschlichen
Keratinozyten durch externe Einflüsse und Stress-
Bedingungen, wie UV-Licht, Zytokine oder Hyperosmolari-
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Zelldifferenzierung
tät. Die Mechanismen, die dieser sogenannten “Rezeptor
trans-Aktivierung” zugrunde liegen, sind bis heute nicht
geklärt. Ob diese “trans-Aktivierung” durch indirekte Einwirkung
von Wachstumsfaktoren zustande kommt, ist bis heute
unbekannt. Sicher ist aber, dass auch Wachstumsfaktoren-unabhängige
Aktivierungsprozesse in der Zelle häufig
zu finden sind.
In einer Reihe von Untersuchungen konnten wir beobachten,
dass osmotischer Schock bei menschlichen Keratinozyten
zu einer starken Aktivierung der EGF-Rezeptoren führt
[5]. Die Analyse der Mechanismen dieser Aktivierung zeigte,
dass die Tyrosinphosphorylierung durch eine Inaktivierung
der EGFR-spezifischen Phosphatase erfolgt. Dadurch wird
die Herunterregulation der Kinaseaktivität verhindert und
die Aktivierung der “down-stream” Kinasekaskaden-Wege
nicht abgeschaltet. Unsere Ergebnisse haben bewiesen,
dass dieser Effekt durch Stresskinase p38 vermittelt wird.
Gleichzeitig mit der Aktivierung der Stresskinase ist eine
starke Desorganisation des Zytoskeletts zu beobachten.
Diese Desorganisation ist parallel zu einer Inhibition der EGFRspezifischen
Phosphatasen, die möglicherweise mit dem
Aktin-Zytoskelett assoziiert sind. Dieser Effekt ist wahrscheinlich
durch eine Stress-bedingte Aktivierung von
Abb. 2: Ligand-freie Aktivierung der EGF Rezeptoren in menschlichen
Keratinozyten. Menschliche Keratinozyten wurden mit 600
mM Sorbitol behandelt, nach 15 Minuten wurden die Signalkaskaden
analysiert. Zentraler Punkt der Aktivierung ist die Stresskinase
p38. Diese Kinase ist in der Lage, die proteolytische Spaltung
der in der Plasmamembran eingebetteten HB-EGF zu induzieren.
HB-EGF stimuliert dann die Tyrosinkinase Aktivität der EGF
Rezeptoren. Ein alternativer Weg führt über eine Aktivierung
von MAPKAP-K2 durch p38 und eine dadurch bedingte Abnahme
der Aktin-gebundenen, EGFR-spezifischen Phosphatase Aktivität.
Obwohl der erste Effekt von Sorbitol unbekannt ist, deuten
experimentelle Ergebnisse darauf hin, dass dieser Effekt durch
Veränderungen in der Phospholipidzusammensetzung der
Membran vermittelt wird.
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
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