MDCK-MRP2 - Dkfz

Forschungsschwerpunkt D
Tumorimmunologie
radioaktive Substanz mit hoher Spezifität an die Tumorzellen
zu bringen. Aufgrund ihrer besonderen physikalischen
Eigenschaften scheinen Alpha-Strahlen emittierende Radioisotope
wie Bismuth-213 ( 213 Bi) besonders geeignet zu sein.
Diese erlauben, bei einer geringen Eindringtiefe von nur
wenigen Zelldurchmessern (50-100 µm) aber hohem linearen
Energietransfer (LET) von ca. 100 keV/µm, das selektive
Applizieren von wesentlich höheren Strahlendosen als
beispielsweise bei einer Therapie mit Betastrahlern. Nachdem
präklinische Experimente mit 213 Bi-gekoppelten anti-
CD19- und anti-CD20-Antikörpern zur Behandlung des Non-
Hodgkin Lymphoms (NHL) viel versprechende Resultate
zeigten, wurde eine Phase I-Studie im Rahmen einer Kooperation
des DKFZ mit der Medizinischen Universitätsklinik
Heidelberg durchgeführt. Bisher wurden bei der Anwendung
des mit einem Chelator versehenen und 213 Bi-markierten
MabThera ® Antikörpers keine relevanten Toxizitäten
bei den Patienten dieser Dosiseskalationsstudie beobachtet.
Die Studie wird derzeit unter Einbeziehung des Universitätsklinkums
Düsseldorf fortgesetzt.
Rekombinante Antikörperkonstrukte:
Um das therapeutische Potential von bispezifischen
CD19xCD3 Konstrukten zu erhöhen, haben wir neue rekombinante
Moleküle generiert. Zu diesen gehört ein tetravalentes
bispezifisches Dimer mit einem Molekulargewicht
von 114 kDa (“Tandem diabody“) sowie ein bivalentes und
bispezifisches Konstrukt mit 57 kDa (“Single-chain diabody“).
Verglichen mit einem konventionellen “Diabody“ wiesen
diese neuen, über einen Peptidlinker verbundenen, Reagenzien
neben einer höheren Affinität und Stabilität in vivo
auch eine längere Retentionszeit im Blut auf. Durch die
Gabe des “Tandem diabody“ zusammen mit humanen peripheren
Blutlymphozyten und einem CD28 monoklonalen
Antikörper konnten Lymphom-tragende SCID-Mäuse vollständig
geheilt werden. Demgegenüber wurde mit dem
konventionellen “Diabody“ nur eine partielle Tumorregression
erzielt. Diese Befunde deuten darauf hin, daß
sich der “Tandem diabody“ zu einem vielversprechenden
Konstrukt für die Behandlung von B-Zellneoplasien entwikkeln
könnte.
Um die unerwünschten Nebenwirkungen von Antikörpertherapien
zu umgehen, die auf der Reaktion gegen das
fremde Immunglobulin beruhen, befassen wir uns mit der
Chimärisierung/Humanisierung von Hybridomantikörpern. Am
Beispiel des von der Maus stammenden monoklonalen Antikörpers
HEA125 (gerichtet gegen das Tumor assoziierte
Ep-CAM Antigen) haben wir eine Methode etabliert, durch
den die konstanten Domänen von Antikörpern direkt in
der sie produzierenden Hybridomzelle humanisiert werden
können. Er basiert auf homologer Rekombination im Genom
der Hybridomzelle. Die Mausgene, die für den konstanten
Teil der leichten Kette des Antikörpers kodieren, konnten
bereits durch dieselben humanen Gene ersetzt werden.
Die Humanisierung der schweren Kette soll nach dem
gleichen Prinzip geschehen. Neu bei der Durchführung der
homologen Rekombination in diesem Fall ist, dass kein Marker
zur Vorselektion mit eingebracht wird. Dieser wird normalerweise
benötigt, um später die sehr wenigen homolog rekombinierten
Zellen (etwa 1 Zelle in 10 Millionen) anreichern
zu können. Jedoch verringert ein Selektionsmarker
meist die Expressionsstärke des Zielgens und damit die Antikörperproduktion
der Hybridomzellen. Um das zu verhindern,
geschieht die Isolierung der Zellen, die chimäre Antikörper
produzieren, ohne Vorselektion direkt mittels FACS-
Sortierer (Fluorescence Activated Cell Sorting). Die Isolie-
Abteilung D050
Molekulare Immunologie
rung per FACS ist möglich, weil die humanisierten Antikörper
auch auf der Oberfläche der sie produzierenden Zellen
ausgeprägt werden und dort als Selektionsmerkmal dienen.
Publikationen (* = externer Koautor)
[1] Gemmel*, C., Cremer*, F.W., Weis*, M., Witzens*, M.,
Moldenhauer, G., Konizczek*, K.-H., Imbach*, U., Ho*, A.D.,
Moos*, M., and Goldschmidt*, H. Anti-CD20 antibody as consolidation
therapy in a patient with primary plasma cell leukemia after
high-dose therapy and autologous stem cell transplantation.
Ann. Hematol. 81: 119-123, 2002.
[2] Moldenhauer, G. Antikörper-gestützte Therapieverfahren bei
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(Hrsg. J.W. Zeller und H. zur Hausen), S. IV-14.1-17. Ecomed
Verlag, Landsberg, 2002.
[3] Kipriyanov*, S.M., Cochlovius, B., Schäfer*, H.,
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[4] Marmé*, A., Strauß*, G., Bastert*, G., Grischke*, E.-M., and
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advanced ovarian carcinoma. Int. J. Cancer 101: 183-189,
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[5] Schweizer, C., Strauß*, G., Lindner*, M., Marmé*, A., Deo*,
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In: Current Cancer Research 2002. Steinkopf Darmstadt,
Springer New York, p. 175-179, 2002.
[8] Mollenhauer, J., Deichmann*, M., Helmke*, B., Müller, H.,
Kollender, G., Holmskov*, U., Ligtenberg*, T., Krebs, I.,
Wiemann, S., Bantel-Schaal, U., Madsen*, J., Bikker*, F., Klauck,
S.M., Otto*, H.F., Moldenhauer, G., and Poustka, A. Frequent
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Int. J. Cancer 105: 149-157, 2003.
[9] Kipriyanov*, S.M., Moldenhauer, G., Braunagel*, M.,
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J. Mol. Biol. 330: 99-111, 2003.
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single-chain Fv and diabody. J. Immunol. Meth. 285: 111-127,
2004.
Transgene Tumormäuse: Kontrolle der
Tumortoleranz und Immunität durch das
Mikromilieu
R. Ganss, N. Garbi, M. Berger, Y. Kawarada, M. Furuya,
S. Stahl, K. Tauber, L. Umansky, C. Schmitt, K. Frank,
B. Arnold, G.J. Hämmerling
In Zusammenarbeit mit E. Klar, R. Ryschich, Universitätsklink
Heidelberg; G. Bergers, UCSF, San Francisco, USA; P. Knolle,
Universität Bonn; A. Hamann, Experimentelle Rheumatologie,
Berlin; Siamon Gordon, Universität Oxford, UK.
In den letzten Jahren durchgeführte Untersuchungen am
Tiermodell und klinische Studien haben gezeigt, dass Tumo-
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
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