MDCK-MRP2 - Dkfz

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Forschungsschwerpunkt F
Infektion und Krebs
Ad 5) Regulation der Apoptose in HPVimmortalisierten
humanen Keratinozyten,
Zervixkarzinomzellen und davon abgeleiteten
somatischen Zellhybriden
A. Aguilar Lemarroy, A. Vega, F. Rösl
In Kooperation mit P. H. Krammer, DKFZ; Ygal Haupt, Hadassah
Medical School, Jerusalem, Israel.
Bei Untersuchungen zu Sensitivität gegenüber eines Apoptose-induzierenden
Antikörpers bzw. des natürlichen Fas-
Liganden (CD95-L) konnten wir festgestellen, daß HPV 16-,
im Gegensatz zu HPV 18-positiven Zervixkarzinomzellinien
für Apoptosesignale weitaus weniger sensitiv, in einigen
Fällen sogar resistent waren. Diese Eigenschaft wird offensichtlich
durch das virale Onkogen E6 reguliert. Denn in
humanen Keratinozyten, welche mittels amphotroper retroviraler
Vektoren separat entweder durch E6 oder E7
bzw. durch beide Onkogene immortalisiert wurden, waren
nur die HPV 16 E7-positive Zellen CD95-sensitiv. Allerdings
können CD95 resistente Keratinozyten durch Blockade des
Proteasoms und Re-Expression von p53 wieder für die CD95vermittelte
Apoptose resensibilisiert werden. p53 kann
somit als ein zentrales Schlüsselprotein in der CD95-vermittelten
Apoptose HPV-positiver Zellen angesehen werden
[9, 10].
Publikationen (* = externer Koautor)
[1] van Riggelen, J., Soto, U. De Castro Arce, J., Buchwalter,
G.*, Wasylyk, B.* und Rösl, F., Loss of Net causes ERK-independent
SRE-activity leading to a constitutive increase of c-fos expression
in cervical carcinoma cells. submitted.
[2] De-Castro Arce, J., Soto, U., van Riggelen, J., Schwarz, E.,
zur Hausen, H., und Rösl, F. Ectopic expression of non-liganded
RARβ abrogates AP-1 activity by selective post-transcriptional
down regulation of c-Jun in cervical carcinoma cells. submitted.
[3] Kleine-Lowinski, K., Rheinwald, J.G.*, Fichorova, R.*, Anderson,
D.J.*, Basile, J.*, Münger, K.*, Daly, C.M.*, Rösl, F. und
Rollins, B.J.* (2003). Selective suppression of monocyte
chemoattractant protein-1 (MCP-1) expression by human
papillomavirus E6 and E7 oncoproteins in human epithelial and
epidermal cells. International Journal of Cancer 107: 407-415.
[4] Bachmann, A., Hanke, B., Zawatzky, R., Soto, U., van
Riggelen, J., zur Hausen, H. und Rösl, F. (2002). Disturbance of
TNF-α mediated interferon-β signaling in cervical carcinoma cells.
Journal of Virology 76: 280-291).
[5] Helfrich, I., Chen, M., Schmidt, R., Fürstenberger, G., Kopp-
Schneider, A., Trick, D., Gröne, H-J., zur Hausen, H. und Rösl, F.
(2004). Increased incidence of squamous cell carcinomas in
Mastomys natalensis papillomavirus E6 transgenic mice during
two-stage skin carcinogenesis. Journal of Virology, 87: 4797-
4805.
[6] Finzer, P., Ventz, R., Kuntzen, C., Seibert, N., Soto, U., zur
Hausen, H. und Rösl, F. (2002). Growth arrest of HPV-positive
cells after histone deacetylase inhibition is independent of E6/E7
oncogene expression. Virology 304: 265-273.
[7] Finzer, P., Stöhr, M., Seibert, N. und Rösl, F. (2003).
Phenylbutyrate inhibits growth of cervical carcinoma cells independent
of HPV type and copy number. Journal of Cancer Research
and Clinical Oncology, 129: 107-113.
[8] Finzer, P., Krueger, A., Stöhr, M., Brenner, D., Soto, U.,
Kuntzen, C., Krammer, P.H. und Rösl, F. (2003). HDAC-inhibitors
trigger type II apoptosis in HPV-positive cells via induction of the
E2F-p73 pathway. Oncogene, revised version submitted.
[9] Aguilar-Lemarroy, A., Gariglio, P., Whitaker, N., Eichhorst, S.,
zur Hausen, H., Krammer, P.H. und Rösl, F. (2002). Restoration
of p53 expression sensitizes human papillomavirus type 16 immortalized
human keratinocytes to CD95-mediated apoptosis.
Oncogene 21: 165-175.
Abteilung F030
Virale Transformationsmechanismen
DKFZ 2004: Wissenschaftlicher Ergebnisbericht 2002 - 2003
[10] Finzer, P., Aguilar-Lemarroy, A. und Rösl, F. (2002). The role
of human papillomavirus oncoproteins E6 and E7 in apoptosis.
Cancer Letters 188: 15-24.
[11] Hergenhahn, M., Soto, U., Weninger, A., Polack, A., Hsu,
C.H., Cheng, A.L. und Rösl, F. (2002). The chemopreventive
compound curcumin is an effective inhibitor of BZLF1 mRNA induction
and Epstein-Barr virus reactivation in Raji-DR-LUC cells.
Molecular Carcinogenesis 33: 137-145.
[12] Grinstein, E.*, Wernet, P.*, Snijders, P.J.F.*, Rösl, F.,
Weinert, I.*, Jia, W.*, Kraft, R.*, Schewe, C.*, Schwabe, W.*,
Hauptmann, S.*, Dietel, M.*, Meijer, C.J.L.M.* und Royer, H-D.*
(2002). Nucleolin as Activator of Human Papillomavirus Type 18
Oncogene Transcription in Cervical Cancer. Journal of Experimental
Medicine 196: 1067-1078.
[13] Baars, S., Bachmann, A., Levitzki, A.* und Rösl, F. (2003).
Tyrphostin AG555 inhibits bovine papillomavirus transcription by
changing the ratio between E2 transactivator/repressor function.
Journal of Biological Chemistry 278: 37306-37313.
Molekulare und biochemische Charakterisierung
von Interferon-induzierbaren möglichen SIRPβ
Homologen aus primären Makrophagen der
Maus
R. Spannagel, M. Klehr und R. Zawatzky
In Zusammenarbeit mit Dr. A. Cerwenka, Arbeitsgruppe
„Angeborene Immunität“, DKFZ
Gefördert durch DFG-Projekt Za98/5-1
Die Familie der „SIRP“ (Signal-Regulatory-Proteins) Transmembranproteine
wird in vielen Zellen hämatopoetischen
Ursprungs exprimiert und reguliert ihren Aktivitätszustand.
SIRPα Moleküle besitzen drei extrazelluläre Ig-Domänen und
mindestens zwei intrazelluläre „ITIM“ (Immune-Receptor-
Tyrosine-based-Inhibition-Motiv). Nach Phosphorylierung binden
die Tyrosinphosphatasen SHP-1 und SHP-2 an die ITIM
und bewirken z.B. eine Hemmung der Aktivität von Makrophagen.
Verantwortlich dafür ist u.a. die Interaktion der
extrazellulären SIRPα Ig-Domänen mit CD47, einem ubiquitär
exprimiertem Transmembranprotein. SIRPβ besitzen im
Gegensatz zu SIRPα eine kurze intrazelluläre Domäne, verfügen
jedoch über einen positiv geladenen Lys-Rest in der
Transmembrandomäne. Eine Signaltransduktion ist daher
nur nach Assoziierung mit einem Adaptorprotein möglich,
welches über die entsprechenden intrazellulären Domänen
verfügt. Im Falle des Human-SIRPβ1 konnte gezeigt werden,
dass eine Interaktion mit dem Adaptormolekül DAP-12
stattfindet, die durch einen negativ geladenen Asp-Rest
in dessen Transmembrandomäne stabilisiert wird und in
transfizierten Zellen zur Aktivierung der Kinase Syk führt,
welche an die aktivierende „ITAM“ Sequenz von DAP-12
bindet.
In unserer Arbeitsgruppe sind mehrere cDNAs in primären
Maus-Makrophagen identifiziert worden, die eine große
strukturelle Homologie zum SIRPβ aufweisen und wahrscheinlich
die noch nicht beschriebenen Maus-Homologe
darstellen. Ziel des Projektes ist daher, mit Hilfe funktioneller
biochemischer Analysen diese Hypothese zu untermauern.
Von besonderem Interesse ist die Beobachtung, dass die
mRNAdieser Proteine nur in Makrophagen nachweisbar sind
und durch Interferone (IFN) induziert werden. Die Induktion
von SIRPβ und deren anschließende Interaktion mit Adaptormolekülen
wären ein neuer Wirkmechanismus, über den
IFN insbesondere die Aktivität von Makrophagen beeinflussen
könnten.