VOLUMEN I

diámetro. El caudal debe ser aproximadamente
1,0 ml por minuto.
Hexano deshidratado - Preparar una columna
cromatográfica empacando un tubo cromatográfico
de 60 cm × 8 cm, con 500 g de tierra silícea para
cromatografía, con un tamaño de partícula de 50 a
250 µm, activada por secado a 150 °C durante
4 horas (ver Cromatografía de adsorción en
columna en 100. Cromatografía). Pasar 500 ml de
hexano a través de la columna y recolectar el eluido
en un recipiente con tapa de vidrio.
Fase móvil - Alcohol n-amílico en Hexano
Deshidratado (3 en 1.000). Hacer los ajustes
necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cromatografía).
Solución de aptitud del sistema - Disolver
aproximadamente 250 mg de Vitamina D para
Aptitud del Sistema de Valoración SR-FA en 10 ml
de una mezcla de tolueno y Fase móvil (50:50).
Calentar esta solución a reflujo a 90 °C durante
45 minutos y enfriar. Esta solución contiene
colecalciferol, pre-colecalciferol y
trans-colecalciferol.
Preparación estándar - [NOTA: emplear
material de vidrio inactínico y preparar las
soluciones en el día de su uso]. Pesar exactamente
alrededor de 30 mg de Ergocalciferol SR-FA,
transferir a un matraz aforado de 50 ml, disolver en
tolueno sin calentar, completar a volumen con
tolueno y mezclar. Transferir 10 ml de esta
solución a un matraz aforado de 50 ml, completar a
volumen con Fase móvil y mezclar para obtener una
solución de aproximadamente 120 µg por ml.
Preparación muestra - [NOTA: emplear
material de vidrio inactínico y preparar las
soluciones en el día de su uso]. Pesar exactamente
alrededor de 30 mg de Ergocalciferol, transferir a
un matraz aforado de 50 ml y proceder según se
indica para Preparación estándar, comenzando
donde dice: “disolver en tolueno sin calentar...”,
para obtener una solución de aproximadamente
120 µg por ml.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y
registrar las respuestas de los picos según se indica
en Procedimiento: la resolución R entre los picos de
trans-colecalciferol y pre-colecalciferol no debe ser
menor de 1; los tiempos de retención relativos
deben ser aproximadamente 0,4 para
pre-colecalciferol, 0,5 para trans-colecalciferol y
1,0 para colecalciferol; la desviación estándar
relativa para inyecciones repetidas no debe ser
mayor de 2 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (entre 5 y 10 µl)
de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C 28 H 44 O en la porción de Ergocalciferol
en ensayo.