VOLUMEN I

disolviendo 5,5 ml de ácido sulfúrico en 100 ml de
agua. Transferir la solución obtenida a un erlenmeyer
de 250 ml y enjuagar el recipiente de combustión
con 25 ml de agua. Agregar 25 ml de edetato
disódico 0,02 M, 10 ml de una solución reguladora
de acetato (SR1) y algunas perlas de vidrio. Mantener
a ebullición suave durante 3 minutos. Agregar
0,1 ml de una solución de 1 mg de 1-(2-
piridilazo)-2-naftol por ml de alcohol y titular con
sulfato de cobre 0,02 M (SV) hasta viraje a color
pardo púrpura. Realizar el ensayo con un blanco y
hacer las correcciones necesarias. Cada ml de edetato
disódico 0,02 M (SV) equivale a 0,5396 mg de
aluminio (Al). No debe contener más de 1,25 mg
de aluminio (Al) por dosis humana, cuando un
adsorbente de aluminio se haya utilizado en la vacuna,
salvo otro caso indicado.
Determinación de calcio en vacunas adsorbidas
Homogeneizar una porción de la muestra en ensayo,
transferir 1 ml a un recipiente apropiado,
agregar 0,2 ml de ácido clorhídrico diluido y diluir
a 3 ml con agua. Medir las absorbancias a 620 nm
utilizando un espectrofotómetro de absorción atómica
(ver Método I en 440. Espectrofotometría de
absorción y emisión atómica) y calcular la cantidad
de calcio presente. No debe contener más de
1,3 mg de calcio (Ca) por dosis humana, cuando un
adsorbente cálcico se haya utilizado en la vacuna,
salvo otro caso indicado.
Formaldehído libre
A menos que se especifique de otro modo en la
monografía correspondiente, emplear el Método I.
El Método II es conveniente para vacunas a las que
se le ha agregado metabisulfito de sodio para neutralizar
el exceso de formaldehído.
Método I
Realizar una dilución 1 en 10 de la vacuna en
ensayo. Transferir 1 ml de la solución obtenida a
un tubo de comparación, agregar 4 ml de agua y
5 ml de una solución de 0,2 ml de acetilacetona en
100 ml de acetato de amonio (SR1). Mantener en
un baño de agua a 40 °C durante 40 minutos. Examinar
la solución: no debe desarrollar coloración
más intensa que la de un control preparado del
mismo modo pero con 1 ml de una solución de
formaldehído que contenga 20 µg de formaldehído
(CH 2 O) por ml.
Método II
Soluciones estándar - Preparar soluciones que
contengan aproximadamente 0,25; 0,50; 1,00 y
2,00 mg de formaldehído por ml. Realizar una
dilución 1 en 200 de cada solución, respectivamente.
Solución muestra - Realizar una dilución 1 en
200 de la vacuna en ensayo. Si la vacuna es una
emulsión, realizar una dilución 1 en 20 empleando
la fase acuosa obtenida por uno de los siguientes
procedimientos: a) agregar 1 ml de la vacuna en
ensayo a 1 ml de miristato de isopropilo y mezclar.
Agregar 1,3 ml de ácido clorhídrico 1 N, 2 ml de
cloroformo y 2,7 ml de una solución de 9 mg de
cloruro de sodio por ml. Mezclar y centrifugar a
15.000 g durante 1 hora. Transferir la fase acuosa a
un matraz aforado de 10 ml y completar a volumen
con agua. Si la separación no se logra, agregar una
cantidad adecuada de una solución de 100 mg de
polisorbato 20 por ml a la solución de cloruro de
sodio empleada y repetir el procedimiento pero
centrifugando a 22.500 g; b) agregar 1 ml de la
vacuna en ensayo a 1 ml de una solución de 100 mg
de cloruro de sodio por ml y mezclar. Centrifugar a
1.000 g durante 15 minutos. Transferir la fase
acuosa a un matraz aforado de 10 ml y completar a
volumen con agua; c) agregar 1 ml de la vacuna en
ensayo a 2 ml de una solución de 100 mg de cloruro
de sodio por ml, agregar 3 ml de cloroformo y mezclar.
Centrifugar a 1.000 g durante 5 minutos,
transferir la fase acuosa a un matraz aforado de
10 ml y completar a volumen con agua.
Procedimiento - Transferir 0,5 ml de la Solución
muestra y 0,5 ml de cada una de las Soluciones
estándar a sendos tubos de ensayo, agregar 5 ml
de una solución recientemente preparada de 0,5 mg
de cloruro de metilbenzotiazolona-hidrazona por
ml. Tapar los tubos, agitar y dejar reposar durante
1 hora. Agregar 1 ml de cloruro férrico-ácido
sulfámico (SR) y dejar reposar durante 15 minutos.
Medir la absorbancia a 628 nm (ver 470. Espectrofotometría
ultravioleta y visible), realizar la curva
de calibración con las Soluciones estándar y calcular
el contenido de formaldehído en la vacuna en
ensayo. El ensayo sólo es válido si el coeficiente de
correlación de la curva de calibración es mayor de
0,97.
La vacuna no debe contener más de 0,2 g por litro
de formaldehído libre en el producto final,
cuando se haya utilizado formaldehído en la preparación
de la vacuna, salvo otro caso indicado.
Fenol
Soluciones estándar - Preparar una serie de soluciones
de Fenol que contengan aproximadamente
5, 10, 15, 20 y 30 µg de fenol por ml.
Solución muestra - Homogeneizar una porción
de la muestra en ensayo, preparar una solución que
contenga aproximadamente 15 µg de fenol por ml.
Procedimiento - A 5 ml de la Solución muestra
y a 5 ml de cada Solución estándar, agregar 5 ml de
Solución reguladora alcalina de borato pH 9,0 (ver