VOLUMEN I

Cultivos de células de riñón de mono para la
producción de la vacuna
Los riñones utilizados para la preparación de
cultivos celulares no deben presentar ningún signo
patológico. Cada grupo de células que deriva de
cada mono individualmente conforma una
producción separada y por lo tanto una cosecha
separada. Los cultivos primarios de células de riñón
de mono en suspensión deben cumplir con 335.
Ensayo de micobacteria y para el cual deben
efectuarse la destrucción de las células previa a su
realización. Si se utilizan células secundarias y
terciarias debe demostrarse por un método
adecuado y validado que de cuenta que el número
de pasajes que se usara en producción esta libre de
tumorogenicidad.
Lotes semilla del virus
Cada una de las 3 cepas del poliovirus
utilizadas en producción deben estar identificadas
por registros históricos que incluyan información
sobre el origen de la cepa y su posterior
manipulación. Para la multiplicación del virus sólo
se puede utilizar un lote semilla que cumpla los
siguientes requisitos.
Identificación
Identificar cada lote semilla de trabajo como
poliovirus humano tipos 1, 2, y 3 por neutralización
en cultivos celulares utilizando anticuerpos
específicos.
Concentración de virus
Determinar según se indica en Valoración. La
concentración de virus se utiliza para establecer la
cantidad de virus utilizada en la inoculación de los
cultivos de producción.
Ensayo para agentes extraños en vacunas
virales
El lote de semilla de trabajo debe cumplir los
requisitos para los lotes semillas de las vacunas
virales. Además, si el aislamiento del lote semilla
de trabajo se produce en cultivos primarios,
secundarios o terciarios se deben confirmar que las
cepas no están contaminadas con virus de simios
tales como la inmunodeficiencia de los simios, virus
40 filovirus, y herpesvirus B (Cercopithecine
herpesvirus I). Las semillas de trabajo de virus
producidos en cultivos primarios, secundarios y
terciarios deben cumplir con los requisitos en
Multiplicación y cosecha del virus monovalente en
esas células.
Multiplicación y cosecha
Todos los procesamientos de los bancos
celulares y de los posteriores cultivos celulares se
realizan bajo condiciones de asepsia, en un área
donde no se manipulen otros tipos de células. En el
medio de crecimiento celular se puede utilizar suero
animal apropiado (pero no suero humano); sin
embargo, el medio final, destinado al
mantenimiento del crecimiento celular a lo largo de
la multiplicación viral, no contiene suero animal. El
suero y la tripsina utilizados en la preparación de
suspensiones celulares y de medios de cultivo
deben estar exentos de agentes extraños. El medio
de cultivo celular puede contener un indicador de
pH, como el rojo de fenol, y antibióticos
autorizados en la concentración efectiva más baja.
Se separan no menos de 500 ml de los cultivos
celulares empleados en la producción de la vacuna,
como muestra de cultivos celulares no infectado
(control celular); cuando se utilizan cultivos
celulares continuos en fermentadores la muestra
control debe tener 200 × 10 6 células, cuando se
utilizan cultivos secundarios y terciarios de células
renales de mono las muestras son equivalentes al
menos 500 ml de células en suspensión a la
concentración usada en la producción.
Para la preparación de la vacuna sólo se pueden
utilizar cosecha de virus individuales que cumplan
los siguientes requisitos. Los ensayos de
identificación de bacterias y de contaminación de
hongos pueden ser realizados como alternativa en
la mezcla de cosechas monovalentes purificada.
Una vez que se haya demostrado la uniformidad de
la producción se puede llevara cabo el ensayo de
concentración de virus en la mezcla de cosechas
monovalentes, purificada.
Células control
Las células control del cultivo celular de
producción a partir del cual se obtiene la cosecha
viral deben cumplir con los requisitos de
Identificación y 415. Ensayo para agentes extraños
en vacunas virales o, si se utilizan cultivos de
células primarias, secundarias o terciarias de riñón
mono cumplen los siguientes:
Ensayo en células de cultivo de riñón de
conejo - Inocular en células de cultivo de riñón de
conejo al menos 10 ml de las mezclas de
sobrenadante líquidos en los cuales se ha
controlado ausencia de herpes B ( Cercophitecine
herpesvirus 1) y otros virus. La dilución de la
siembra en el medio de crecimiento no debe ser
mayor de 0,25 y el área de la capa celular de 3
cm 3 /ml de inoculo. Separar uno o más envases de
cada lote de células con el mismo medio como
control de células no inoculadas. Incubar los
cultivos a 37 °C durante 2 semanas. Los ensayos
no son válidos si más de 20 % de los frascos de
cultivo fueron descartados por razones accidentales
no específicas.
Ensayo en células de riñón de monos
cercopitecos - Inocular 10 ml de las mezclas de
sobrenadante líquidos en los cuales se ha controlado