VOLUMEN I

CIANOCOBALAMINA
NH 2
O
NH 2
H
CH 3 H 3 C
H 2 N
NH 2
O
O
O
CN
H 3 C N N H
+
H 3 C
Co
N
O
H N N CH N
3 NH 2
H 2 N
CH 3
O
H 3 C
CH
H
3
O
N
H
H
-
O
OH
O P O O O
CH 3
OH
C 63 H 88 CoN 14 O 14 P PM: 1355,4 68-19-9
Sinonimia - Vitamina B 12 .
Definición - Cianocobalamina debe contener
no menos de 96,0 por ciento y no más de 100,5 por
ciento de C 63 H 88 CoN 14 O 14 P, calculado sobre la
sustancia seca y debe cumplir con las siguientes
especificaciones.
Caracteres generales - Cristales de color rojo
oscuro o polvo cristalino o amorfo de color rojo.
La forma anhidra es muy higroscópica y expuesta al
aire puede absorber hasta un 12 % de agua. Soluble
en alcohol; moderadamente soluble en agua; insoluble
en acetona, cloroformo y éter.
Sustancia de referencia - Cianocobalamina
SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
Identificación
A - Examinar el espectro de absorción obtenido
en Valoración. La Solución muestra debe presentar
máximos a 278 ± 1 nm y 361 ± 1 nm y a
550 ± 2 nm. La relación A 361 /A 278 se debe encontrar
entre 1,70 y 1,90 y la relación A 361 /A 550 debe estar
comprendida entre 3,15 y 3,40.
B - Fundir aproximadamente 1 mg de Cianocobalamina
con aproximadamente 50 mg de pirosulfato
de potasio en un crisol de porcelana. Enfriar,
deshacer la masa con una varilla de vidrio, agregar
3 ml de agua y disolver por calentamiento a ebullición.
Agregar 1 gota de fenolftaleína (SR) y una
solución de hidróxido de sodio 1 en 10, gota a gota,
hasta color rosado incipiente. Agregar 500 mg de
CH 3
CH 3
acetato de sodio, 0,5 ml de ácido acético 1 N y
0,5 ml de solución de sal nitroso R (1 en 500): debe
aparecer inmediatamente un color rojo o rojo anaranjado.
Agregar 0,5 ml de ácido clorhídrico y
calentar a ebullición durante 1 minuto: el color rojo
no debe desaparecer.
C - Disolver aproximadamente 5 mg de Cianocobalamina
en 5 ml de agua en un balón de destilación
de 50 ml conectado a un refrigerante corto.
Agregar al balón 2,5 ml de ácido hipofosforoso,
calentar a ebullición durante 10 minutos. Destilar
1 ml en un tubo de ensayo que contenga 1 ml de
solución de hidróxido de sodio 1 en 50. Agregar
4 gotas de solución saturada de sulfato ferroso
amónico en frío al destilado, agitar, agregar
aproximadamente 30 mg de fluoruro de sodio y
calentar el contenido a ebullición. Agregar de inmediato,
gota a gota, ácido sulfúrico 5 N hasta que
la solución se torne transparente, luego agregar 3 a
5 gotas más del ácido: debe desarrollar color azul o
verde azulado.
Pérdida por secado
Pesar exactamente alrededor de 25 mg de Cianocobalamina,
secar al vacío 105 °C y a una presión
de no más de 5 mm Hg durante 2 horas, enfriar
y pesar: no debe perder más de 12,0 % de su peso.
Pseudo cianocobalamina
Disolver 1,0 mg de Cianocobalamina en 20 ml
de agua dentro de una ampolla de decantación,
agregar 5 ml de una mezcla de tetracloruro de carbono
y cresol (50:50) y agitar durante aproximadamente
1 minuto. Dejar separar, transferir la fases
inferior a una segunda ampolla de decantación,
agregar 5 ml de ácido sulfúrico 5 N, agitar y dejar
separar las fases, centrifugando si fuera necesario:
la fase superior debe ser incolora o presentar una
coloración no más intensa que una mezcla de
0,15 ml de permanganato de potasio 0,10 N y
250 ml de agua.
VALORACIÓN
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de Cianocobalamina SR-FA en
agua y diluir cuantitativamente y en etapas con agua
para obtener una solución de aproximadamente
30 µg por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alrededor
de 30 mg de Cianocobalamina, transferir, con
la ayuda de agua, a un matraz aforado de 1 litro,
completar a volumen con agua y mezclar.
Procedimiento - Determinar concomitantemente
las absorbancias de ambas soluciones en celdas
de 1 cm a la longitud de onda de máxima absorción,
aproximadamente 361 nm, con un espectrofotómetro
apropiado, empleando agua como blanco. Cal-