VOLUMEN I

matografía líquida o por otro método adecuado
como SDS-PAGE con coloración de Coomassie o
plata. El método elegido debe tener la sensibilidad
suficiente como para detectar un posible contaminante
con una concentración de 1 % de las proteínas
totales. El HBsAg no debe representar menos de
95 % de la proteína total.
Composición
Determinar el contenido de proteínas, lípidos,
ácidos nucleicos y carbohidratos.
ADN residual de la célula huésped y del vector
Si la vacuna es producida a partir de células de
mamíferos, no debe contener más de 10 pg de ADN
en la cantidad de antígeno equivalente a una dosis
humana de vacuna.
Cesio
Si durante el proceso de producción se utiliza
una sal de cesio, realizar un ensayo de cesio residual
en el antígeno purificado. El contenido debe
encontrarse entre los límites aprobados para el producto
específico.
Ensayo de esterilidad
Debe cumplir con los requisitos, sembrando
10 ml en cada medio.
Dependiendo del método de producción utilizado,
se podrán requerir otros análisis adicionales
sobre el antígeno purificado: por ejemplo un ensayo
para determinar el contenido de suero animal residual,
si el sustrato corresponde a células de mamífero;
o pruebas para sustancias químicas usadas durante
la extracción y la purificación
Vacuna final a granel
La vacuna puede contener un conservante antimicrobiano
y un adyuvante. Para la preparación del
lote final solamente se puede utilizar una vacuna
final a granel que cumpla los siguientes requisitos.
Conservantes
No debe contener menos de 85 % ni más de
115 % de la cantidad declarada.
Ensayos de esterilidad
Debe cumplir con los requisitos, sembrando
10 ml en cada medio.
Lote final
El lote final de vacuna debe cumplir con los requisitos
indicados en Ensayos y Valoración para
poder ser liberado para su uso. Si los ensayos de
Formaldehído libre y 80. Conservantes, fueron
hechas sobre la vacuna final a granel, y dieron resultados
satisfactorios, las mismas pueden omitirse
en el lote final. Si la Valoración es realizada in
vivo en el lote final a granel, con resultados satisfactorios,
esta puede omitirse en el lote final.
ENSAYOS
Identificación
La prueba de valoración, o el perfil electroforético
(donde se pueda realizar), pueden servir para
identificar la vacuna.
Aluminio
Proceder según se indica en Determinación de
aluminio en 745. Vacunas de uso humano.
Formaldehído libre
Proceder según se indica en Formaldehído libre
en 745. Vacunas de uso humano.
Conservantes
No debe contener menos que la cantidad que
demostró ser efectiva ni más de 115 por ciento de la
cantidad declarada.
Ensayos de esterilidad
Debe cumplir con los requisitos.
Ensayo de piretógenos
Inyectar el equivalente a una dosis humana a
cada conejo.
VALORACIÓN
El ensayo de valoración de la vacuna de Hepatitis
B puede ser realizado in vivo, por comparación
en condiciones dadas de su capacidad de inducir
anticuerpos específicos contra antígeno de superficie
de Hepatitis B en ratones o cobayos con la misma
capacidad que la preparación de referencia, o in
vitro, mediante la determinación inmunoquímica
del contenido de antígeno.
Ensayo in vivo
Selección y distribución de los animales en el
ensayo - Utilizar en el ensayo ratones sanos provenientes
del mismo stock, de aproximadamente
5 semanas de edad. La cepa de ratón usada para este
ensayo debe dar una pendiente significativa en las
curvas de dosis-respuesta para el antígeno, son
adecuadas ratones con haplotipo H-2 q o H-2 d . También
son adecuados, cobayos sanos, de aproximadamente
7 semanas de edad, pesando entre 300 a
350 g provenientes del mismo stock. Usar animales
del mismo sexo. Distribuir los animales en al menos
7 grupos de un número adecuado para cumplir los
requerimientos del ensayo.
Determinación de la potencia - Usando una solución
de 9 g de cloruro de sodio por litro conteniendo
aluminio usado como adyuvante en la vacuna
u otro diluyente, preparar al menos tres diluciones
de la vacuna en ensayo e idénticas diluciones
para la preparación de referencia. Asignar las diluciones
una para cada uno de los grupos de animales
e inyectar intraperitonealmente no más de 1,0 ml de
cada dilución en cada animal de cada grupo para las