VOLUMEN I

- características bioquímicas (análisis de
isoenzimas)
- características inmunológicas (antígenos de
histocompatibilidad)
- marcadores citogenéticas.
Células contaminantes
El análisis del patrón de ácidos nucleicos
llevado a cabo para la identificación también puede
servir para demostrar la ausencia de células
contaminantes.
Contaminación bacteriana y fúngica
El banco maestro de células y cada banco de
trabajo de células deben cumplir con los requisitos
de 370. Ensayos de esterilidad usando para cada
medio 10 ml del sobrenadante fluido de los cultivos
celulares. Realizar el ensayo sobre el 1 % de los
envases con un mínimo de dos envases.
Micoplasmas
El banco maestro de células y cada banco de
trabajo de células deben cumplir con los requisitos
de 336. Ensayo de Micoplasmas.
Agentes extraños en cultivos celulares
Las células deben cumplir con los requisitos de
Virus hemadsorbentes y Agentes extraños en
cultivos celulares en Cultivo celular de producción
en 415. Ensayos para agentes extraños en vacunas
virales de uso humano.
Co-cultivo
Co-cultivar las células con otros sistemas
celulares, incluyendo células humanas y células de
simio. Examinar para detectar posibles cambios
morfológicos y realizar los ensayos para determinar
virus hemaglutinantes. Las células deben cumplir
con los requisitos si no se encuentra evidencia de
presencia de agentes extraños.
Retrovirus
Investigar la presencia de retrovirus usando
ensayos de infectividad y microscopia electrónica.
En caso de que ambos ensayos den resultados
negativos, llevar a cabo la investigación de
transcriptasa reversa (en presencia de magnesio y
manganeso) sobre el pellet obtenido por
centrifugación a alta velocidad.
Ensayos en animales
Inyectar por vía intramuscular (en el caso de
ratones lactantes, por vía subcutánea profunda), al
menos 10 7 células viables a cada uno de los
siguientes grupos de animales repartidas por igual
entre los animales de cada grupo:
(a) dos camadas de ratones lactantes de menos
de 24 h de edad, incluyendo al menos 10,
(b) 10 ratones adultos,
Inyectar por vía intracerebral 10 6 células viables
en cada uno de diez ratones adultos para detectar la
presencia posible de virus de la coriomeningitis
linfocítica. Observar los animales durante al menos
4 semanas. Estudiar los animales que enferman o
manifiestan cualquier anormalidad para establecer
la causa de estos trastornos. Las células cumplen
con los requisitos si no se encuentran indicios de la
presencia de cualquier agente extraño. El ensayo
sólo es válido si al menos el 80 por ciento de los
animales de cada grupo permanece sano y
sobrevive durante todo el período de observación.
Ensayos en huevos
Inyectar al menos 10 6 células viables en la
cavidad alantoica de cada uno de diez huevos
embrionados de gallina LPE de 9 a 11 días y en la
yema de cada uno de diez huevos embrionados de
gallina LPE de 5 a 6 días. Incubar durante no
menos de 5 días. Analizar los fluidos alantoicos en
busca de la presencia de hemaglutininas utilizando
eritrocitos de ave, realizar el ensayo a 5 ± 3 °C y a
una temperatura comprendida entre 20 y 25 °C y
leer los resultados después de 30 y 60 minutos. Las
células cumplen el ensayo si no se encuentran
indicios de la presencia de cualquier agente extraño.
El ensayo sólo es válido si al menos un 80 por
ciento de los embriones permanecen sanos y
sobreviven durante todo el período de observación.
Ensayo para tumorigenicidad in vitro
Realizar alguno de los sistemas de ensayos
siguientes:
- Formación de colonias en gel de agar blando
- Producción de crecimiento celular invasivo
luego de la inoculación en órganos
- Estudio de la actividad de transformación
usando, por ejemplo, el sistema de ensayo 3T3 para
oncogenes
activos.