VOLUMEN I

inocularse células de esa especie. Las células son
incubadas a 36 1 °C y observadas durante 14 días.
El lote de semilla viral o la cosecha cumplen con
los requisitos si ninguno de los cultivos celulares
muestra evidencia de algún agente extraño no
atribuible a una contaminación accidental. El
ensayo sólo es válido si por lo menos el 80 % de los
cultivos celulares permanecen viables.
NOTA: realizar este ensayo solo en virus
propagados en tejidos aviares.
Neutralizar una mezcla equivalente a 100 dosis
humanas o 10 ml. Inocular 0,5 ml de la muestra en
ensayo a sendos huevos de un primer grupo de
huevos LPE fertilizados de 9 y 11 días de edad por
vía alantoica y un segundo grupo de 5 a 7 días de
edad dentro del saco de la yema. Incubar durante
7 días. El lote de semilla viral o la cosecha
cumplen el ensayo si los fluidos alantoicos y el saco
de la yema no muestran signos de presencia de
cualquier agente hemaglutinante y si todos los
embriones y las membranas coreoalantoicas
examinadas son normales. El ensayo sólo es válido
si por lo menos el 80 % de los huevos inoculados
sobreviven durante 7 días.
Examinar microscópicamente las células control
para verificar la ausencia de cualquier virus
causante de efecto citopático a lo largo del tiempo
de incubación de los cultivos celulares de
producción inoculados o como mínimo 14 días
después del momento de inoculación de los frascos
de producción. El ensayo sólo es válido si por lo
menos el 80 % de los cultivos celulares control
sobreviven hasta el final del período de
observación. A los 14 días o en el momento de la
última cosecha del virus, si el tiempo es mayor,
proceder según se indica en Virus hemadsorbentes.
Examinar no menos de 25 % de los cultivos
control para detectar la presencia de virus
hemadsorbentes por adición de glóbulos rojos de
cobayo. Las células rojas sanguíneas de cobayo se
deben almacenar a 5 3 °C durante no más de
7 días. Examinar la mitad de los cultivos después
de la incubación a 5 3 °C durante 30 minutos y la
otra mitad después de la incubación entre 20 y
25 °C durante 30 minutos. La muestra cumple con
los requisitos si no se encuentra evidencia de la
presencia de agentes hemadsorbentes.
Mezclar los sobrenadantes fluidos de las células
control y examinar para detectar la presencia de
agentes extraños por inoculación de cultivos de
células de riñón de simio o humanas. Si el virus de
la vacuna desarrolla en un sistema celular deferente
al humano o simio, inocular células de esas especies
pero de lotes diferentes. En cada sistema celular se
deben ensayar al menos 5 ml. Incubar los cultivos
inoculados a una temperatura de 36 1 °C y
observar por un período de 14 días. La muestra
cumple el ensayo si no se encuentra evidencia de la
presencia de agentes extraños.
Si la producción de cultivos celulares se
mantiene a una temperatura diferente de 36 1 °C
realizar un ensayo suplementario para agentes
extraños a la temperatura de producción utilizando
el mismo tipo de células que la usada para el
desarrollo del virus.
NOTA: realizar este ensayo solo en virus
propagados en tejidos aviares.
Realizar un ensayo para leucosis aviar
utilizando 5 ml del fluido sobrenadante de las
células control.
Examinar 0,25 ml del fluido alantoideos de cada
huevo para agentes hemaglutinantes por mezcla
directa con glóbulos rojos de pollo y después de un
pasaje en huevos LPE, realizado por inoculación de
una muestra de 5 ml de la mezcla de fluidos
alantoideos de los huevos en volúmenes de 0,5ml
dentro de la cavidad alantoidea y dentro de la
cavidad amniótica de los huevos SPF. Los huevos
control cumplen con el ensayo si no se encuentra
evidencia de la presencia de agentes
hemaglutinantes en ninguno de los ensayos.
Utilizar una muestra de 10 ml de la mezcla de
fluidos amnióticos de los huevos control. Realizar
una amplificación mediante cinco pasajes en
cultivos celulares de embriones de pollo libres de
leucosis. Realizar el ensayo para leucosis aviar
utilizando células del quinto pasaje. Los huevos
control cumplen con el ensayo si no se encuentra
evidencia de la presencia de virus de la leucosis
aviar.
Inocular 5 ml de muestra de las mezclas de
fluidos amnióticos de los huevos control en cultivos
celulares humanos y de simios. Observar los
cultivos celulares durante 14 días. Los huevos
control cumplen con el ensayo si no se encuentra
evidencia de agentes extraños. El ensayo sólo es
válido si por lo menos el 80 % de los cultivos
inoculados sobreviven durante 7 días.