VOLUMEN I

HEPARINA CÁLCICA
Definición - Heparina Cálcica es la sal cálcica de
un glucosaminoglicano sulfatado presente en los tejidos
de mamíferos. Se obtiene a partir de pulmón del
ganado bovino o de la mucosa intestinal del ganado
bovino o porcino. Se produce de manera de minimizar
o eliminar la contaminación microbiana y las
sustancias hipotensoras. Por hidrólisis total, se libera
D-glucosamina, ácido D-glucurónico, ácido
L-idurónico, ácido acético y ácido sulfúrico. Presenta
la propiedad característica de retrasar la coagulación
de la sangre recientemente extraída. La actividad de
la Heparina Cálcica destinada a la administración
parenteral no debe ser menor de 150 UI por miligramo,
calculada sobre la sustancia seca. La actividad de
la Heparina Cálcica no destinada a la administración
parenteral no debe ser menor de 120 UI por miligramo,
calculada sobre la sustancia seca. Heparina
Cálcica debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales - Polvo blanco o casi blanco.
Moderadamente higroscópico. Fácilmente soluble
en agua.
Sustancias de referencia - Heparina Bovina
SR-FA. Heparina Porcina SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases herméticos de cierre inviolable.
Precaución - Los animales a partir de los cuales
la Heparina se obtiene deben cumplir los requerimientos
de animales sanos apropiados para el consumo
humano, con la autorización de la Autoridad
Sanitaria competente. El proceso de manufactura
deberá estar validado para demostrar la apropiada
inactivación o remoción de cualquier contaminación
por virus u otro agente infeccioso.
ENSAYOS
Identificación
A - Debe retrasar la coagulación de sangre recién
extraída.
B - Examinar por electroforesis de zona (ver 300.
Electroforesis) empleando agarosa para electroforesis
como soporte [NOTA: también se puede emplear
como soporte para electroforesis tiras de acetato de
celulosa]. Para equilibrar la agarosa y como solución
electrolítica, emplear una mezcla de 50 ml de ácido
acético glacial y 800 ml de agua. Ajustar a pH 3 con
hidróxido de litio y diluir a 1 litro con agua.
Solución muestra - Disolver 25 mg de Heparina
Cálcica en agua y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
Solución estándar - Diluir la Heparina SR-FA correspondiente
con agua para obtener una solución
similar a la Solución muestra.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la tira
entre 2 y 3 µl de Solución estándar y Solución
muestra. Aplicar una corriente eléctrica de 1 a 2 mA
por centímetro de ancho de tira, a una diferencia de
potencial de 300 V, durante aproximadamente
10 minutos. Teñir las tiras empleando una solución
de azul de toluidina al 0,1 % y lavar para eliminar el
exceso de colorante. La relación entre la movilidad
de la banda principal o de las bandas en el electroforegrama
obtenido a partir de la Solución muestra y la
movilidad de la banda en el electroforegrama obtenido
con la Solución estándar debe estar comprendido
entre 0,9 y 1,1.
C - Una solución de Heparina Cálcica debe responder
a los ensayos para Calcio
Determinación de la rotación óptica
Rotación específica: No menos de +35, determinada
a 20 ºC sobre la sustancia seca.
Solución muestra: 40 mg por ml, en agua.
Determinación del pH
Entre 5,5 y 8,0, determinado sobre una solución de
Heparina Cálcica de aproximadamente 10 mg por ml
en agua libre de dióxido de carbono.
Impurezas proteicas y nucleotídicas
Disolver 40 mg de Heparina Cálcica en agua,
transferir a un matraz aforado de 10 ml, completar a
volumen con el mismo solvente y mezclar. La absorbancia
de esta solución (ver 470. Espectrofotometría
ultravioleta y visible), determinada a 260 y 280 nm,
no debe ser mayor de 0,20 y 0,15, respectivamente.
Determinación de Nitrógeno
Método I. No más de 2,5 %, con respecto a la sustancia
seca; determinado sobre 100 mg.
Calcio
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Heparina
Cálcica, transferir a un erlenmeyer de 500 ml y
agregar 300 ml de agua. Agregar 6 ml de solución de
hidróxido de sodio al 42 % y 15 mg de una mezcla de
cloruro de sodio y ácido calcona carboxílico (99:1).
Titular con edetato disódico 0,1 M (SV) hasta que el
color cambie de violeta a azul nítido (ver 780. Volumetría).
Cada ml de edetato disódico 0,1 M equivale
a 4,008 mg de Ca. No debe contener menos de 9,5 ni
más de 11,5 % de Ca, calculado sobre la sustancia
seca.
Determinación del residuo de ignición
Entre 32,0 y 40,0 %, con respecto a la sustancia
seca; determinado sobre 200 mg.