VOLUMEN I

INMUNOGLOBULINA
HUMANA ANTITETÁNICA
Definición - La Inmunoglobulina Humana
Antitetánica es una preparación, líquida o
liofilizada, que contiene inmunoglobulinas,
principalmente inmunoglobulina G (IgG). La
preparación está destinada a la administración por
vía intramuscular. Se obtiene a partir de plasma
que contiene anticuerpos específicos contra la
toxina del Clostridium tetani. Se le puede agregar
Inmunoglobulina Humana Normal.
PRODUCCIÓN
Durante el desarrollo, debe establecerse una
relación satisfactoria entre la potencia determinada
por inmunoensayo tal como se describe en
Valoración y la determinada mediante el ensayo de
Capacidad neutralizante de toxina en ratones,
según se describe a continuación.
Capacidad neutralizante de toxina en ratones
La potencia se determina comparando la
cantidad necesaria para proteger ratones de los
efectos paralizantes de una cantidad determinada de
toxina tetánica, con la cantidad de una preparación
de referencia de Inmunoglobulina Humana
Antitetánica, calibrada en Unidades Internacionales,
necesaria para conferir la misma protección.
La Unidad Internacional de antitoxina es la
actividad neutralizante específica para la toxina
tetánica contenida en una determinada cantidad de
la Preparación Patrón Internacional, constituida por
inmunoglobulina humana liofilizada. La
Organización Mundial de la Salud establece la
equivalencia en Unidades Internacionales de la
Preparación Patrón Internacional.
Selección de animales - Emplear ratones con
un peso comprendido entre 16 y 20 g.
Preparación de la toxina de prueba - Preparar
la toxina de prueba mediante un método apropiado,
a partir del filtrado estéril de un cultivo en medio
líquido de C. tetani. Los dos métodos descriptos a
continuación se citan como ejemplos. Puede
emplearse cualquier otro método apropiado.
(1) Añadir 1 ó 2 volúmenes de glicerina al
filtrado de un cultivo de aproximadamente 9 días y
conservar la mezcla en estado líquido, ligeramente
por debajo de 0 °C.
(2) Precipitar la toxina agregando al filtrado
sulfato de amonio, secar el precipitado al vacío
sobre pentóxido de fósforo, reducir a polvo y
almacenar en seco, ya sea en ampollas selladas o al
vacío sobre pentóxido de fósforo.
Determinación de la dosis de prueba de la
toxina (Lp/10 dosis) - Preparar una solución de la
preparación patrón en un líquido apropiado, de tal
manera que contenga 0,5 UI de antitoxina por ml.
Si la toxina de prueba se conserva en forma de
polvo, reconstituirla en un líquido apropiado.
Preparar una serie de mezclas de la solución de la
preparación patrón de antitoxina patrón (0,5 UI por
ml) y de la solución de la toxina en ensayo, de tal
manera que cada mezcla contenga 2,0 ml de la
solución de preparación patrón y una serie gradual
de volúmenes de la toxina de prueba. Ajustar el
volumen final de cada mezcla a 5,0 ml, con un
líquido apropiado. Mantener las mezclas protegidas
de la luz durante 60 minutos. Empleando seis
ratones para cada mezcla, inyectar una dosis de
0,5 ml subcutánea en cada ratón. Mantener los
ratones en observación durante 96 horas. Los
ratones que sufran parálisis pueden ser sacrificados.
La dosis de prueba de la toxina es la contenida en
0,5 ml de la mezcla preparada con la menor
cantidad de toxina capaz de provocar a pesar de su
neutralización parcial por la preparación patrón de
antitoxina, la parálisis de los seis ratones a los que
se inyectó, durante el período de observación.
Determinación de la potencia de la
inmunoglobulina - Preparar una solución de la
preparación patrón, con un líquido apropiado, de tal
manera que contenga 0,5 UI de antitoxina por ml.
Preparar una solución de la toxina de prueba, en un
líquido apropiado de forma tal que contenga cinco
dosis de prueba por ml. Preparar una serie de
mezclas de la solución de la toxina de prueba y de
la inmunoglobulina a ser examinada, de manera tal
que cada mezcla contenga 2,0 ml de la solución de
la toxina de prueba y una serie gradual de
volúmenes de la inmunoglobulina a ser examinada.
Ajustar el volumen final de cada mezcla a 5,0 ml,
con un líquido apropiado. Preparar una segunda
serie de mezclas de la solución de la toxina de
prueba y porciones de la antitoxina patrón, de forma
tal que cada mezcla contenga 2,0 ml de la solución
de la toxina de prueba y una serie gradual de
volúmenes de la preparación de referencia; en esta
segunda serie de mezclas, la dilución media de la
preparación de referencia corresponde a una mezcla
que contenga 1 UI (2,0 ml) de la solución de la
preparación patrón. Ajustar el volumen final de las
mezclas a 5,0 ml, con un líquido apropiado.
Mantener las mezclas de las dos series protegidas
de la luz durante 60 minutos. Empleando seis
ratones para cada mezcla, inyectar una dosis de
0,5 ml subcutánea en cada ratón. Mantener los
ratones en observación durante 96 horas. Los
ratones que sufran parálisis pueden ser sacrificados.
La mezcla que contenga el mayor volumen de