VOLUMEN I

Glucosa monohidrato…………………..… 2,50 g
Fosfato dibásico de potasio…………………2,50 g
Cloruro de sodio…………………………. 5,00 g
Agua purificada c.s.p……………………. 1.000 m
pH después de la esterilización: 7,3 ± 0,2.
Disolver los componentes sólidos en el agua,
calentando suavemente. Enfriar la solución a
temperatura ambiente y ajustar con hidróxido de
sodio 1 N para obtener, después de la esterilización,
un pH de 7,3 ± 0,2. Filtrar, si fuera necesario, y
envasar en recipientes apropiados. Esterilizar
empleando un procedimiento validado.
Medios para penicilinas, cefalosporinas,
cefamicinas y monobactámicos
Cuando se empleen Medio Tioglicolato y Caldo
Digerido de Caseína-Soja en el Método de
transferencia directa para penicilinas o
cefalosporinas, suplementarlos mediante el
agregado en forma aséptica de cantidad suficiente
de una beta-lactamasa apropiada para inactivar
totalmente la cantidad de antibiótico presente en la
muestra.
Cuando se emplee el Método por filtración,
también puede ser necesario el agregado de una
beta-lactamasa apropiada a los medios de cultivo
y/o a las soluciones de enjuague.
La cantidad y/o tiempo de contacto deben ser
establecidas mediante la validación del
procedimiento.
ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Verificar la esterilidad de cada lote incubando
una muestra del mismo a la temperatura
correspondiente a cada medio, durante 14 días o
incubando un recipiente con medio no inoculado
como control negativo en paralelo al ensayo de
esterilidad.
ENSAYO DE PROMOCIÓN DEL
CRECIMIENTO
Examinar cada lote para determinar su
capacidad de promover el crecimiento microbiano a
través de su inoculación en envases separados, con
no más de 100 ufc de cada una de las cepas
descriptas en la Tabla 1 e incubando en las
condiciones especificadas.
Los medios de cultivo son aceptables si existen
evidencias de crecimiento en todos los envases
inoculados dentro de los 3 días de incubación para
bacterias y 5 días para hongos y levaduras. El
ensayo de esterilidad no es válido si el medio de
cultivo presenta una respuesta inapropiada al
crecimiento microbiano.
ALMACENAMIENTO
Si los medios se almacenan en envases sellados
pueden ser empleados durante no más de 1 año,
pero se deben llevar a cabo los ensayos de
promoción del crecimiento cada 3 meses y
confirmar si cumplen con los requisitos
correspondientes al color del indicador.
Si los medios se almacenan en recipientes no
sellados, pueden conservarse hasta 1 mes a menos
que se haya validado un período mayor que no
podrá exceder los 2 meses.
Se recomienda conservar los medios de cultivo
entre 2 y 25 °C.
SOLUCIONES DE LAVADO Y DILUCION
Solución A - Disolver 1 g de peptona de carne
en Agua purificada hasta obtener 1 litro. Filtrar o
centrifufar, si fuera necesario, para obtener una
solución transparente. Ajustar a pH 7,1 ± 0,2,
envasar en recipientes apropiados y esterilizar
utilizando un procedimiento validado. [NOTA:
cuando la Solución A deba ser empleada para
realizar el ensayo de esterilidad de una muestra de
antibióticos del tipo penicilina, cefalosporina,
cefamicina o monobactámico, agregar
asépticamente a la misma, una cantidad de
betalactamasa estéril suficiente para inactivar el
antibiótico residual en las membranas después que
la solución muestra haya sido filtrada].
Solución D - Agregar 1 ml de polisorbato 80
por cada litro de Solución A cuando la muestra
contiene lecitina, aceite o en los ensayos para
determinar la esterilidad de las partes internas de
dispositivos estériles por filtración a través de
membrana. Ajustar a pH 7,1 ± 0,2. Transferir a los
envases y esterilizar.
Solución K -
Peptona de carne ………………………... 5,00 g
Extracto de carne ……………………….. 3,00 g
Polisorbato 80 …………………………... 10,0 g
Agua purificada c.s.p. …………………... 1.000 ml
pH después de la esterilización: 6,9 ± 0,2.
Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar.
ENSAYO DE APTITUD
Antes de efectuar un ensayo de esterilidad de un
producto dado, se deberá demostrar la ausencia de
actividad bacteriostática y fungistática del mismo.
El ensayo de aptitud deberá efectuarse cada vez que
se cambia alguna condición del ensayo o cuando