VOLUMEN I

Fase móvil - Heptano, diisopropil éter y octanol
(1.000:3,3:0,67). Filtrar y desgasificar. Hacer los
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cromatografía).
Preparación estándar A - Pesar exactamente alrededor
de 15 mg de Fitomenadiona SR-FA, transferir
a un matraz aforado de 10 ml, disolver y completar
a volumen con Fase móvil.
Preparación estándar B - Pesar exactamente alrededor
de 15 mg de Fitomenadiona SR-FA y
4,0 mg de Trans-epoxifitomenadiona SR-FA, transferir
a un matraz aforado de 10 ml, disolver y completar
a volumen con Fase móvil.
Preparación muestra - Pesar exactamente alrededor
de 15 mg de Fitomenadiona, transferir a un
matraz aforado de 10 ml, disolver y completar a
volumen con Fase móvil.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) -
Cromatografiar la Preparación estándar B y registrar
las respuestas de los picos según se indica en
Procedimiento: el ensayo solo es válido si el orden
de elución es: trans-epoxifitomenadiona,
cis-fitomenadiona y trans-fitomenadiona. Cromatografiar
la Preparación estándar A y registrar las
respuestas de los picos según se indica en Procedimiento:
la resolución R entre los picos de
trans-fitomenadiona y cis-fitomenadiona debe ser
mayor de 2,5; la desviación estándar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
20 µl) de la Preparación estándar A y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir
las respuestas de los picos principales.
Calcular el porcentaje de trans-fitomenadiona
en la porción de Fitomenadiona en ensayo, por la
fórmula siguiente:
en la cual A cis es el porcentaje de cis-fitomenadiona
en Fitomenadiona SR-FA, r Mcis y r Ecis son las respuestas
de los picos correspondientes al isómero cis
en la Preparación muestra y la Preparación estándar
A, respectivamente y los demás términos son
los definidos anteriormente.
Calcular el porcentaje de trans-epoxifitomenadiona
en la porción de Fitomenadiona en ensayo,
por la fórmula siguiente:
A epoxi P E r Mepoxi /P M r Eepoxi
en la cual A epoxi es el porcentaje de
epoxi-fitomenadiona en Fitomenadiona SR-FA,
r Mepoxi y r Eepoxi son las respuestas de los picos correspondientes
a trans-epoxifitomenadiona en la
Preparación muestra y la Preparación estándar A,
respectivamente y los demás términos son los definidos
anteriormente.
A trans P E r Mtrans /P M r Etrans
en la cual A trans es el porcentaje de
trans-fitomenadiona en Fitomenadiona SR-FA, P E
es el peso en mg de Fitomenadiona SR-FA en la
Preparación estándar A, P M es el peso en mg de
Fitomenadiona en la Preparación muestra y r Mtrans
y r Etrans son las respuestas de los picos correspondientes
al isómero trans en la Preparación muestra
y la Preparación estándar A, respectivamente.
Calcular el porcentaje de cis-fitomenadiona en
la porción de Fitomenadiona en ensayo, por la
fórmula siguiente:
A cis P E r Mcis /P M r Ecis