VOLUMEN I

1,0; 1,2 y 1,6 µg de cinc por ml. [NOTA: preparar
estas soluciones en el momento de su uso].
Solución muestra - Transferir un volumen de la
Preparación Inyectable de Insulina que contenga
200 UI por ml de Insulina, a un matraz aforado de
25,0 ml, disolver en ácido clorhídrico 0,01 N,
agitando suavemente y completar a volumen con el
mismo solvente. Si fuera necesario, diluir con
ácido clorhídrico 0,01 N para obtener una solución
entre 0,4 y 1,6 µg de cinc por ml.
Procedimiento - Determinar las absorbancias de
las Soluciones estándar y la Solución muestra en la
línea de emisión del cinc a 213,9 nm, con un
espectrofotómetro de absorción atómica (ver 440.
Espectrofotometría de absorción y emisión
atómica) equipado con una lámpara de cinc de
cátodo hueco y una llama de acetileno-aire
(aproximadamente 2 litros de acetileno y 11 litros
de aire por minuto). Graficar las absorbancias de
las Soluciones estándar en función de la
concentración en µg por ml de cinc y determinar la
concentración de cinc en µg por ml en la Solución
muestra.
MÉTODO B
Proceder según se indica en Determinación de
cinc .
Cinc en solución
Cuando corresponda, el contenido no debe ser
mayor al indicado en la monografía
correspondiente.
MÉTODO A
Solución madre del estándar, Soluciones
estándar y Procedimiento - Proceder según se
indica en Método A en Cinc total.
Solución muestra - Diluir 1 ml del líquido
sobrenadante límpido obtenido mediante
centrifugación de la Preparación Inyectable de
Insulina a 25,0 ml con agua. Diluir con agua, si
fuera necesario, para obtener una solución entre 0,4
y 1,6 µg de cinc por ml.
MÉTODO B
Proceder según se indica en Determinación de
cinc .
Ensayo de endotoxinas bacterianas
Debe contener menos de 80 Unidades de
Endotoxina por 100 UI de Insulina.
Ensayos de esterilidad
Debe cumplir con los requisitos.
VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 214 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 5 µm de diámetro. Mantener la
columna a 40 °C. El caudal debe ser
aproximadamente 1 ml por minuto.
[NOTA: preparar y mantener las soluciones a
una temperatura no menor de 20 °C con el fin de
evitar la precipitación].
Solución A - Disolver 28,4 g de sulfato de sodio
anhidro en 1 litro de agua. Agregar 2,7 ml de ácido
fosfórico y ajustar a pH 2,3 con etanolamina, si
fuera necesario.
Solución B - Solución A y acetonitrilo (55:45).
Calentar la solución a una temperatura no inferior a
20 ºC.
Fase móvil - Solución B y Solución A (58:42).
Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios
(ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar A - Disolver el contenido
de un envase de Insulina Porcina SR-FA en ácido
clorhídrico 0,01 N para obtener una solución de
aproximadamente 4 mg por ml.
Preparación estándar B - Si la sustancia en
ensayo es Insulina Bovina, disolver 40,0 mg de
Insulina Bovina SR-FA en 10 ml de ácido
clorhídrico 0,01 N.
Preparación estándar C - Disolver el contenido
de un envase de Insulina Humana SR-FA en ácido
clorhídrico 0,01 N para obtener una solución de
aproximadamente 4 mg por ml.
[NOTA: las Preparaciones estándar A, B o C se
emplean para preparaciones que contienen una sola
especie de insulina].
Preparación estándar D - Mezclar 1 ml de
Preparación estándar A y 1 ml de Preparación
estándar B. [NOTA: esta solución se emplea para
preparaciones que contienen mezcla de Insulina
Bovina e Insulina Porcina].
Preparación estándar E - Diluir 4 ml de la
Preparación estándar A, B, C o D correspondiente
en 10 ml ácido clorhídrico 0,01 N.
Solución de comparación A - Transferir 1,0 ml
de Preparación estándar A, B, C o D según
corresponda a un matraz aforado de 10 ml,
completar a volumen con ácido clorhídrico 0,01 N y
mezclar.
Solución de comparación B - Transferir 1,0 ml
de Preparación estándar E, acorde a la muestra a
analizar, a un matraz aforado de 10 ml, completar a
volumen con ácido clorhídrico 0,01 N y mezclar.
Preparación muestra - Agregar a la
Preparación Inyectable de Insulina (solución o
suspensión en ensayo) 4 µl de ácido clorhídrico 6 N
por ml, para obtener una solución límpida de
insulina. Cuando la muestra es una suspensión,
agitar el material previamente con el fin de obtener
una muestra homogénea. Si la suspensión no se