VOLUMEN I

VALORACIÓN
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 272 nm y una columna de
25 cm × 4,6 mm, con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por
minuto.
Fase móvil - Agua y metanol (75:25). Filtrar y
desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver
Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).
Preparación estándar - Pesar exactamente
alrededor de 30 mg de Cafeína y 15 mg de
teobromina, transferir a un matraz de 100 ml,
agregar cantidad suficiente de Fase móvil y agitar
hasta disolver. Completar a volumen con Fase
móvil y mezclar. Transferir 10 ml de esta solución
a un matraz aforado de 100 ml y completar a
volumen con el mismo solvente.
Preparación muestra - Pesar exactamente
alrededor de 1,0 g de Nuez de Cola previamente
reducida a polvo fino, transferir a un recipiente
adecuado y agregar 50 ml de metanol. Calentar a
reflujo en baño de agua durante 30 minutos, enfriar
a temperatura ambiente y filtrar. Lavar el filtro con
10 ml de metanol y retomar el residuo con 50 ml de
metanol y repetir la operación anterior. Reunir los
filtrados y las soluciones de lavado en un matraz
aforado de 200 ml y completar a volumen con
metanol. Transferir 20 ml de esta solución a un
balón y evaporar hasta sequedad a presión reducida.
Disolver el residuo con Fase móvil, transferir a un
matraz aforado de 50 ml y completar a volumen con
Fase móvil.
Aptitud del sistema - Cromatografiar la
Preparación estándar y registrar las respuestas de
los picos según se indica en Procedimiento: la
resolución R entre los picos de cafeína y teobromina
debe ser mayor de 2,5. Si fuera necesario, ajustar el
volumen de agua en la proporción de Fase móvil.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales de Preparación
estándar y de Preparación muestra. Registrar los
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
correspondientes a cafeína. Calcular el porcentaje
de cafeína en la porción de Nuez de Cola, por la
fórmula siguiente:
50(P E /P M )(r M /r E )
en la cual r M y r E son las respuestas de los picos
correspondientes a cafeína en el cromatograma
obtenido con la Preparación muestra y la
Preparación estándar, respectivamente, P M es el
peso en g de Nuez de Cola en la Preparación
muestra y P E es el peso en g de Cafeína en la
Preparación estándar.