VOLUMEN I

muestra (ufc/ml). Si no se detectan colonias en las
placas, expresar los resultados como menor a la
inversa del valor de la dilución utilizada, por ejemplo
para la dilución 1:10 se expresa como menor a
10 ufc/g o ml de muestra. Tener en cuenta que el
resultado se debe expresar en función de la dilución
y el volumen sembrado.
Siembra en superficie -
Sembrar en superficie no más de 0,1 ml de la dilución
final sobre al menos dos placas con Agar
Digerido de Caseína-Soja previamente secadas en
incubadora o campana de flujo laminar. Incubar a
30 - 35 °C durante no menos de 3 días. Luego de la
incubación, examinar las placas para observar si
hubo desarrollo. Contar el número de colonias y
expresar el promedio para las dos placas como el
número de unidades formadoras de colonias por g
(ufc/g) o por ml de muestra (ufc/ml). Si no se detectan
colonias en las placas, expresar los resultados
como menor a la inversa del valor de la dilución
utilizada y el volumen sembrado.
Tubos múltiples (número más probable – NMP -
Agregar a cada uno de catorce tubos de ensayo
de tamaño similar, 9 ml de Caldo Digerido de Caseína-Soja
esterilizado. Distribuir doce de los tubos
en cuatro grupos de tres tubos cada uno. Uno de los
cuatro grupos servirá como control. Transferir 1 ml
de la solución o suspensión de la muestra a cada
uno de los tres tubos de un grupo (“100”) y a un
cuarto tubo (A) y mezclar. Transferir 1 ml del contenido
del tubo (A), al tubo restante (B) no incluido
en ningún grupo y mezclar. Estos dos tubos contienen
0,1 g (ó 0,1 ml) y 0,01 g (ó 0,01 ml) de la
muestra, respectivamente. Transferir 1 ml del contenido
del tubo (A) a cada uno de los tres tubos del
segundo grupo (0,01) y 1 ml del contenido del tubo
(B) a cada uno de los tubos del tercer grupo (0,001).
Descartar el contenido remanente de los tubos (A) y
(B). Tapar e incubar todos los tubos a 30 - 35 °C no
más de 3 días. Luego del período de incubación,
examinar los tubos para detectar turbidez: los tres
tubos controles deben permanecer sin desarrollo y
los tubos que contienen la muestra deben compararse
con la Tabla 4 para determinar el NMP/g ó ml de
producto. En caso que la turbidez de la muestra
enmascare el desarrollo microbiano, subcultivar en
el mismo caldo o en Agar Digerido de Caseína-Soja
a 30 – 35 ºC durante 24 a 48 horas.
Filtración -
Usar filtros de membrana con tamaño nominal
de poro no mayor de 0,45 µm. Elegir el material de
la membrana tal que la eficiencia de la retención
microbiana no sea afectada por los componentes de
la muestra. Transferir la cantidad apropiada de la
dilución de muestra a una membrana y filtrar inmediatamente.
Lavar el filtro según se haya determinado
previamente. Transferir la membrana a la
superficie de una placa conteniendo Agar Digerido
de Caseína-Soja. Incubar a 30 – 35 °C durante no
menos de 3 días. Calcular el número de ufc por g ó
ml de producto.
En el caso de parches transdérmicos filtrar un
volumen tal que la muestra filtrada corresponda a
una unidad. Expresar el recuento como ufc / parche.
Informe de los resultados -
En los métodos de recuento en placa el número
de microorganismos aerobios totales se informará
como la sumatoria de todas las colonias desarrolladas
en las placas de Agar Digerido de Caseína-Soja
incluidos hongos filamentosos y levaduras.
Recuento combinado de hongos filamentos y
levaduras
Siembra en profundidad –
Proceder según se indica en Recuento de microorganismos
aerobios totales empleando Agar Sabouraud
Dextrosa o Agar Papa Dextrosa. Incubar
las placas sin invertir, a 20 - 25 °C durante no menos
de 5 días. Luego de la incubación, examinar las
placas para observar si hubo desarrollo. Continuar
según lo indicado en Siembra en profundidad para
recuento de microorganismos aerobios totales.
Siembra en superficie -
Proceder según se indica en Recuento de microorganismos
aerobios totales. Preparar al menos dos
placas empleando Agar Sabouraud Dextrosa o Agar
Papa Dextrosa para cada nivel de dilución, previamente
secadas en incubadora o campana de flujo
laminar. Sembrar en superficie no más de 0,1 ml
sobre cada placa. Incubar a 20 – 25 °C durante no
menos de 5 días. Luego de la incubación, examinar
las placas para observar si hubo desarrollo. Continuar
según se indica en Siembra en profundidad
para Recuento de microorganismos aerobios totales,
teniendo en cuenta el volumen sembrado.
Filtración -
Proceder según se indica en Recuento de microorganismos
aerobios totales. Transferir la membrana
a la superficie de una placa conteniendo Agar
Sabouraud Dextrosa o Agar Papa Dextrosa. Incubar
a 20 – 25 °C durante no menos de 5 días. Calcular
el número de ufc por g ó ml de producto.
En el caso de parches transdérmicos filtrar un
volumen tal que la muestra filtrada corresponda a
una unidad. Expresar el recuento como ufc / parche.
Informe de los resultados -
En los métodos de recuento en placa el número
de microorganismos aerobios totales se informará