VOLUMEN I

Ensayo 2
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía)
recubierta con gel de sílice para cromatografía
con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm
de espesor.
Fase móvil - Acetato de etilo y tolueno (93:7).
Solución estándar - Preparar una solución de
Bisabolol SR-FA en tolueno (1:30).
Solución muestra - Diluir 1 ml del aceite esencial
de Manzanilla con 9 ml de tolueno
Revelador - Reactivo vainillina-sulfúrico.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa, en bandas, 3 µl aproximadamente, 100 µg, de
la Solución estándar, y 5 µl de la Solución muestra.
Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente del solvente haya recorrido
aproximadamente tres cuartas partes de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
marcar el frente del solvente y dejar que el solvente
se evapore. Pulverizar sobre la placa con Revelador.
Calentar la placa a 110 °C durante 5 a 10 minutos.
Examinar la placa a la luz visible. El cromatograma
obtenido con la Solución muestra presenta
una banda de color amarillo-verdosa correspondiente
al óxido de bisabolol con un valor de de
aproximadamente 0,2; dos bandas violetas correspondientes
a espatulenol y bisabolol con un valor de
de aproximadamente 0,25 y 0,35 que coincide en
posición y color con la banda obtenida a partir de la
Solución estándar. Se observan también dos bandas
de color castaño oscuro con un valor de de 0,5
y 0,6; y una banda rojo-violeta con un valor de de
0,95 correspondiente al azuleno y otra de color
azul-violeta con un de 0,99 correspondiente al
farneseno.
Cenizas totales (ver 630. Métodos de Farmacognosia)
No más de 13,0 %.
Determinación de aceites esenciales (ver 630.
Métodos de Farmacognosia)
Reducir a polvo grueso la Manzanilla, pesar
60,0 g y transferir a un balón de 500 ml. Agregar
0,5 ml de xileno en el tubo graduado y destilar con
300 ml de agua, a una velocidad entre 3 y 4 mm por
minuto durante 2 horas.
Control higiénico (ver 630. Métodos de Farmacognosia)
Debe cumplir con los requisitos.
Determinación de aflatoxinas
Debe cumplir con los requisitos.
Pérdida por secado (ver 630. Métodos de Farmacognosia)
No más de 10,0 %.
Residuos de pesticidas (ver 630. Métodos de
Farmacognosia)
Debe cumplir con los requisitos.
Sustancia orgánica extraña (ver 630. Métodos
de Farmacognosia)
No más de 2,0 %.
VALORACIÓN
Contenido de 7-glucósido de apigenina
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 335 nm y una columna de
12,5 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. Programar
la fase móvil para obtener una composición
variable de Solución A y Solución B según se indica:
en el momento de la inyección la proporción de
Solución B corresponde al 26 %; mantener ese nivel
durante 3 minutos; luego aumentar linealmente
durante los siguientes 19 minutos hasta 85 % de
Solución B; luego disminuir linealmente durante los
siguientes 5 minutos a 26 % de Solución B y mantener
esa composición durante los siguientes
3 minutos antes de la próxima inyección. El caudal
debe ser aproximadamente 1 ml por minuto
Ácido fosfórico diluido - Transferir 5,0 ml de
ácido fosfórico a un matraz aforado de 100 ml,
agregar 50 ml de agua, diluir con agua a volumen y
mezclar.
Solución A - Preparar una solución de fosfato
monobásico de potasio 0,5 M. Ajustar con Ácido
fosfórico diluido a un pH de 2,55 ± 0,05.
Solución B - Preparar una mezcla de acetonitrilo
y metanol (65:35).
Preparación estándar - Disolver una cantidad
exactamente pesada de 7-O-glucósido de apigenina
y 7-metoxicumarina en metanol y diluir cuantitativamente
y en etapas si fuera necesario, con metanol
hasta obtener una solución con concentraciones
conocidas de aproximadamente 25,0 µg de 7-Oglucósido
de apigenina y 10,0 µg de 7-
metoxicumarina por ml.
Preparación muestra - Pesar exactamente alrededor
de 1,0 g de Manzanilla, transferir a un erlenmeyer
equipado con un refrigerante y un agitador,
agregar 80,0 ml de metanol, y calentar a reflujo la
mezcla con agitación durante 1 hora. Enfriar el
erlenmeyer a temperatura ambiente, filtrar la solución
metanólica a través de un papel de filtro plegado
y recoger el filtrado en un matraz aforado de
100 ml. Lavar el matraz con 3 ml de metanol, verter
los lavados a través del papel de filtro y agregar
el filtrado al matraz aforado. Diluir con metanol a
volumen, mezclar y filtrar. Transferir 25,0 ml de la